[發明專利]一種三聯毒品熒光免疫層析試劑紙、檢測試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 202110563112.8
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113358862A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 唐勇;徐濤;滕佩君
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

1.磁性熒光探針的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)標記抗體：將磁性熒光微球活化后，用MES緩沖液超聲重懸，分別加入MET抗體、MOR抗體、KET抗體、羊抗雞IgY抗體，室溫下低速混旋反應至少1h；

(2)封閉：向各抗體標記的磁性熒光微球中分別加入牛血清白蛋白，旋轉反應至少30min，離心后取沉淀，分別得到MET抗體標記磁性熒光探針、MOR抗體標記磁性熒光探針、KET抗體標記磁性熒光探針及羊抗雞IgY抗體標記磁性熒光探針。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)所述的活化，是將磁性熒光微球用MES緩沖液清洗并重懸，再加入碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫下混旋反應至少30min，離心后取沉淀。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

所述的MES緩沖液，濃度0.1M，pH值6.0；

所述的離心是15000rpm離心30min。

4.磁性熒光探針，其特征在于：是由權利要求1-3任一項所述的方法制得。

5.一種磁性熒光探針凍干粉，其特征在于：是將MET抗體標記磁性熒光探針、MOR抗體標記磁性熒光探針、KET抗體標記磁性熒光探針和羊抗雞IgY抗體標記磁性熒光探針分別以等量的標記保存液重懸，然后將三種檢測探針以體積比1:1:1混勻，最后將三種檢測探針的混合溶液與羊抗雞IgY抗體標記磁性熒光探針以9:1的體積比混合，裝入凍存管中，進行冷凍干燥，即得磁性熒光探針凍干粉。

6.根據權利要求5所述的磁性熒光探針凍干粉，其特征在于：所述標記保存液的配方如下：在0.1M的Gly-NaOH緩沖液中分別加入質量比為5％蔗糖、5％海藻糖、1％BSA、0.5％酪蛋白鈉、0.02％Proclin300。

7.一種三聯毒品熒光免疫層析試紙條，其特征在于：是由樣品墊、NC膜和吸水墊組成；

所述的NC膜，從靠近樣品墊的一端依次設有MET檢測線、MOR檢測線、KET檢測線和質控線。

8.根據權利要求7所述的試紙條，其特征在于：所述各檢測線、質控線的間距為3.5mm，KET檢測線與吸水墊的距離為11mm。

9.權利要求7或8所述的三聯毒品熒光免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將MET-BSA、MOR-BSA、KET-BSA和雞IgY分別包被于NC膜上，干燥后依次形成MET檢測線、MOR檢測線、KET檢測線和質控線，作為處理后的NC膜；

(2)將玻璃纖維素膜用緩沖液處理，然后干燥，作為樣品墊；取吸水紙充分干燥后，作為吸水墊；將樣品墊、NC膜和吸水墊依次鋪于PVC底板上，經剪切后得到試劑紙。

10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)的操作采用X、Y、Z三維點膜噴金儀操作，MET-BSA濃度為0.25mg/mL，MOR-BSA濃度為0.5mg/mL，KET-BSA濃度為2mg/mL，雞IgY濃度為1mg/mL，在NC膜上的包被量為1μL/cm。

11.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)所述緩沖液的配方是，在0.015M、pH值7.4的PBS緩沖液中分別加入質量比為0.5％S-9表面活性劑、0.1％酪蛋白鈉鹽和1％蔗糖。

12.一種三聯毒品熒光免疫檢測卡，其特征在于含有權利要求7或8所述的三聯毒品熒光免疫層析試紙條。