[發明專利]一種用于結直腸癌早期診斷的生物標志物組合物及應用

在審

• 申請號: 202110562717.5
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113106163A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 陳朋;周忠坤;李洋;馬萬通;劉宇恒;張仁濤;馬云浩;杜康嘉
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/06;G06F17/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種結直腸癌生物標志物組合物，其特征在于，所述生物標志物組合物包括口炎消化鏈球菌(Peptostreptococcus stomatis)，具核梭狀桿菌(Fusobacterium nucleatum)，微小微單胞菌(Parvimonas micra)，雙歧桿菌(Bifidobacterium)。

2.一種檢測結直腸癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述生物標志物組合物的量化試劑，所述量化試劑用于量化權利要求1所述的生物標志物組合物中的每一組分。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述量化試劑采用的原理為實時定量PCR法。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述量化試劑包括用于擴增權利要求1所述生物標志物組合物的引物組，所述引物組包括用于擴增權利要求1所述生物標志物組合物每一組分的引物對。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述引物組的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-8所示。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述量化試劑還包括用于擴增總菌的引物對。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述用于擴增總菌的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.9-10所示。

8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述量化試劑還包括實時定量PCR反應試劑。

9.如權利要求2-8任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于檢測糞便中人血紅蛋白的糞便隱血檢測試劑。

10.如權利要求9所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述試劑盒用于檢測結直腸癌時的步驟為：檢測權利要求1所述的生物標志物組合物中每一組分及總菌在樣本中的豐度以及糞便隱血值，再通過回歸方程判斷檢測結果。

11.如權利要求10所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述試劑盒用于檢測結直腸癌時，包括以下步驟：

(1)糞便隱血值測定：采用糞便隱血檢測試劑測定受試者糞便樣品的隱血結果值X₀，其中隱血結果為陽性時X₀＝1，隱血結果為陰性時X₀＝0；

(2)以受試者糞便基因組DNA為模板，采用試劑盒中的量化試劑分別檢測每個生物標志物的擴增值Ct_標志物，和總菌的擴增值Ct_總菌；

(3)根據公式(Ⅰ)分別確定樣本中生物標志物組合物中每一組分在總菌中的相對含量Ct值，

Ct＝lg(2^(Ct_標志物-Ct_總菌))

(Ⅰ)；

(4)根據回歸方程計算出Y值，并將Y值帶入公式(Ⅱ)計算P值，其中，e為自然常數，

(5)結果判定：當P0.5，結直腸癌診斷結果為陽性；當P≤0.5，結直腸癌診斷結果為陰性。