[發明專利]一種從牛奶中提取細胞外囊泡的方法

有效

• 申請號: 202110560726.0
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113215079B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 關瑞禮;譚曉輝;方冬;李學松;周利群
• 申請（專利權）人: 北京大學第一醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N15/87;A61K47/46
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 安志嬌

1.一種從牛奶中提取細胞外囊泡的方法，其特征在于，包括：乳清中加入硫酸銨的步驟，所述乳清中加入硫酸銨所得溶液中4℃下硫酸銨飽和度為20%-50%；所述乳清中加入硫酸銨所得溶液于4°C放置12小時后，離心，收集沉淀；所述離心條件為：4°C、5000 xg離心60min；將沉淀重新懸浮于磷酸鹽緩沖生理鹽水中，得重懸液；

取所述的重懸液，排除直徑大于200nm的蛋白，得到細胞外囊泡粗提物；

將細胞外囊泡粗提物使用截留分子量100k、濾膜標稱孔徑10nm的離心濃縮管在4°C下5000 xg離心1 h。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳清中加入硫酸銨所得溶液中4℃下硫酸銨飽和度為20%、22%、24%、26%、28%、30%、32%、34%、36%、38%、40%或50%。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述乳清的獲得方法包括如下步驟：

1）取脫脂牛奶調整pH為4.6，靜置5分鐘以上；

2）22°C下5000 xg離心60min。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述脫脂牛奶為經過巴氏殺菌的脫脂牛奶。