[發(fā)明專利]中藥多糖醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖的分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110559300.3
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113109489B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏永剛;李野;梁軍
• 申請（專利權(quán)）人: 夏永剛
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京思元知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

本發(fā)明公開了中藥多糖醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖的分析方法，包括：(1)分別制備木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的標(biāo)準(zhǔn)品工作液；(2)制備待檢測的樣品溶液；(3)采用超高效液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用方法對待檢測的樣品溶液中醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖進(jìn)行定性和定量分析。本發(fā)明所建立的分析方法符合方法學(xué)驗(yàn)證的要求，并且操作簡便、靈敏度高、適用性強(qiáng)，具有良好的專屬性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和準(zhǔn)確度，能夠用于對中藥中多糖單糖組成的分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥多糖和氨基酸的分析方法，尤其涉及一種同時(shí)對中藥多糖中醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖進(jìn)行定性和定量分析的方法，屬于中藥多糖和氨基酸的液相色譜質(zhì)譜分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)

中藥多糖是指由10個(gè)以上單糖通過糖苷鍵連接而成的聚合物，廣泛存在于植物、微生物、藻類和動(dòng)物體內(nèi)。中藥多糖對腫瘤、肝炎、心血管病等疾病的預(yù)防和治療，以及調(diào)節(jié)糖代謝和抗衰老等方面具有獨(dú)特的生物活性，且毒副作用低，被廣泛研究和開發(fā)應(yīng)用。由于中藥多糖所具有生物活性與其結(jié)構(gòu)緊密相關(guān)，而多糖的結(jié)構(gòu)又相當(dāng)復(fù)雜，有效成分及其結(jié)構(gòu)和功能不清楚制約了它的發(fā)展，因此，多糖結(jié)構(gòu)的測定越來越引起國內(nèi)外科研工作者的興趣，并成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。

在中藥多糖的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)及其構(gòu)效關(guān)系的研究中，單糖組成是最基本的研究對象。傳統(tǒng)的衍生化方法主要包括1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮、阿爾迪醇衍生化、糖腈衍生化，檢測方法主要要包括高效液相儀、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀。然而，目前報(bào)道的分析方法對糖醛酸的靈敏度較低，并且不能同時(shí)對醛糖、酮糖和糖醇進(jìn)行檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種能夠同時(shí)定性和定量分析醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖的液相色譜質(zhì)譜分析方法；

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案包括：

一種同時(shí)定性和定量檢測分析中藥多糖中醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖的方法，包括：

(1)分別制備木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的標(biāo)準(zhǔn)品工作液；

(2)制備待檢測的樣品溶液；

(3)采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，對待檢測的樣品溶液中木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸進(jìn)行定性和定量分析。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的具體實(shí)施方案，制備木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的標(biāo)準(zhǔn)品工作液的方法優(yōu)選為：

(a)分別將木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸對照品中加入鹽酸羥胺再溶于吡啶進(jìn)行反應(yīng)；(b)反應(yīng)液放涼后加入鹽酸甲醇進(jìn)行反應(yīng)；(c)將步驟(b)的反應(yīng)液減壓濃縮至干加入0.1％鹽酸甲醇溶液振蕩后再次減壓濃縮至干；(d)加入乙酸酐和吡啶進(jìn)行反應(yīng)；(e)向反應(yīng)產(chǎn)物中加入氯仿后，加入少量超純水充分震蕩后，除去上層水溶液；(f)氯仿層氮?dú)獯蹈桑靡译嫒芙猱a(chǎn)物得到對照品溶液。

進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟(a)中分別稱定木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸以及半乳糖醛酸的對照品各2.00mg，分別加入10mg鹽酸羥胺，溶于500μL吡啶；步驟(a)中所述的反應(yīng)優(yōu)選在90℃下反應(yīng)30min。