[發明專利]中藥多糖醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖的分析方法

有效

• 申請號: 202110559300.3
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113109489B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 夏永剛;李野;梁軍
• 申請（專利權）人: 夏永剛
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.對中藥多糖中醛糖、酮糖、糖醇、糖醛酸和氨基糖的組成種類或含量同時進行分析的方法，其特征在于，包括：

(1)分別制備木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的標準品工作液；所述制備木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的標準品工作液的方法包括：(a)分別將木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸對照品中加入鹽酸羥胺再溶于吡啶進行反應；(b)反應液放涼后加入鹽酸甲醇進行反應；(c)將步驟(b)的反應液減壓濃縮至干加入0.1％鹽酸甲醇溶液振蕩后再次減壓濃縮至干；(d)加入乙酸酐和吡啶進行反應；(e)向反應產物中加入氯仿后再加入少量超純水充分震蕩后，除去上層水溶液；(f)氯仿層氮氣吹干，用乙腈溶解產物得到對照品溶液；

(2)制備待檢測的樣品溶液；所述待檢測的樣品溶液的制備方法包括：

(Ⅰ)將待檢測的樣品加入三氟乙酸進行水解反應；(Ⅱ)將水解液減壓濃縮至干加入甲醇溶液振蕩后再次減壓濃縮至干；(Ⅲ)濃縮后的產物加入鹽酸羥胺后溶于吡啶中進行反應；(Ⅳ)步驟(Ⅲ)的反應產物放涼后加入鹽酸甲醇進行反應；(Ⅴ)反應溶液減壓濃縮至干后加入0.1％鹽酸甲醇溶液，振蕩后減壓濃縮至干；(Ⅵ)濃縮后的產物加入乙酸酐和吡啶進行反應后再加入氯仿，加入少量超純水充分震蕩除去上層水溶液；(Ⅶ)氯仿層氮氣吹干，乙腈溶解，過濾，制備得到樣品溶液；

(3)采用超高效液相色譜-質譜聯用方法，對待檢測的樣品溶液中木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的組成種類或含量進行分析；所述的超高效液相色譜-質譜聯用方法的條件包括：色譜柱：Waters?Acquity?BEH?ShieldRP18?column；柱溫：25℃；流速：0.3mL/min；進樣量：1μL；

流動相：A％∶B％＝0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈；

梯度洗脫條件如下：0～10min，15％～23％B；10～16min，23％B；16～28min，23-28％B；采用電噴霧離子源，正模式下選用選擇離子監測模式檢測；碰撞電壓：20-30V；去簇電壓：80-120V；檢測離子對：338→278阿拉伯糖，木糖，核糖；352→298巖藻糖，鼠李糖；410→350葡萄糖，半乳糖，甘露糖；470→338果糖；409→349氨基葡萄糖，氨基半乳糖，氨基甘露糖；457→397葡萄糖醇，半乳糖醇，甘露糖醇；396→336葡萄糖醛酸，半乳糖醛酸。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(a)中分別稱定木糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖、葡萄糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醛酸以及半乳糖醛酸的對照品各2.00mg，分別加入10mg鹽酸羥胺溶于500μL吡啶；步驟(a)中所述的反應在90℃下反應30min；

步驟(b)中反應液放涼后加入0.9M鹽酸甲醇2mL，所述的反應在100℃下反應1h；

步驟(c)中將步驟(b)的反應液在50℃減壓濃縮至干，加入0.1％鹽酸甲醇溶液適量，振蕩后50℃減壓濃縮至干，重復三次；

步驟(d)中加入乙酸酐和吡啶各500μL，于90℃下反應30min；

步驟(e)中向反應產物加入1mL氯仿后，加入少量超純水充分震蕩后，除去上層水溶液，重復3次。