[發(fā)明專利]一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110558911.6
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113203614B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈曉晨;王珂清;吳洋;秦艷華;張合川;朱懷遠(yuǎn);王瑞;殷瑜東
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/31
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 裴金華

1.一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將再造煙葉磨成煙末，干燥至恒重備用；

S2、稱取步驟S1中準(zhǔn)備的煙末置于反應(yīng)器中，加入去離子水，再加入碳酸酐酶，然后通入CO₂進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完成后封閉反應(yīng)器，置于冰浴中振蕩，然后過濾，得到待測液；

S3、將步驟S2得到的待測液用冰水稀釋后采用原子吸收分光光度計(jì)測量Ca²⁺的吸光度，然后帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得出待測液中Ca²⁺的濃度C；

所述標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作方法：配制不同濃度的Ca²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用原子吸收分光光度計(jì)測量不同濃度Ca²⁺的吸光度，然后以Ca²⁺濃度為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

S4、空白樣品中Ca²⁺濃度C₀的計(jì)算方法：稱取步驟S1中準(zhǔn)備的煙末置于反應(yīng)器中，加入去離子水，再加入碳酸酐酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完成后封閉反應(yīng)器，置于冰浴中振蕩，然后過濾，得到空白待測液，將空白待測液用冰水稀釋后采用原子吸收分光光度計(jì)測量Ca²⁺的吸光度，然后帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得出空白待測液中Ca²⁺的濃度C₀；

S5、再造煙葉中碳酸鈣的含量按照下式計(jì)算得出：

上式中：

X——再造煙葉中碳酸鈣的含量，單位為微克每克（μg/g）；

C——由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得出的目標(biāo)物的濃度，單位為微克每毫升（μg /mL）；

C₀——由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得出的空白樣品中目標(biāo)物濃度，單位為微克每毫升（μg /mL）；

V——萃取液體積，單位為毫升（mL）；

f——稀釋因子；

M——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；

100——CaCO₃的式量；

40——Ca²⁺的式量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法，其特征在于，所述步驟S2和S4中煙末、去離子水與碳酸酐酶的質(zhì)量比為（2000-4000）：（500000-1000000）： 1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法，其特征在于，所述步驟S2中通入CO₂的時(shí)間為20~60min，通入CO₂的流速為0.5~2.0mL/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法，其特征在于，所述步驟S2和步驟S4中冰浴溫度均為0~4℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法，其特征在于，所述步驟S2和步驟S4中震蕩時(shí)間均為20~60min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用酶促反應(yīng)測定再造煙葉中碳酸鈣的方法，其特征在于，所述步驟S3中待測液與所述步驟S4中空白待測液均用冰水稀釋90-110倍。