[發(fā)明專利]一種結(jié)合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110556399.1
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN113117148A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白晉
• 申請（專利權(quán)）人: 白晉
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/36;A61L27/24;A61L27/50;A61L27/54
• 代理公司: 北京鑫瑞森知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11961
• 代理人: 韓鳳穎

本發(fā)明涉及一種結(jié)合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑，屬于醫(yī)學(xué)美容技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述自體膠原蛋白注射劑的制備原料包括：成纖維細(xì)胞和膠原蛋白、林格氏液l、葡萄糖液和肉毒桿菌，所述成纖維細(xì)胞和膠原蛋白、林格氏液l、葡萄糖液和肉毒桿菌的質(zhì)量體積比為10g：5ml～20ml：10ml～30ml：5μg～20μg。該技術(shù)方案通過將自體的成纖維細(xì)胞分離，通過成纖維細(xì)胞分泌出膠原蛋白，在作為自體膠原蛋白注射劑后能夠減少人體排異反應(yīng)，并將肉毒桿菌與自體膠原蛋白注射劑結(jié)合，在利用肉毒桿菌造成皺紋的肌肉麻痹掉，使肌肉不收縮的同時，利用注射劑內(nèi)的成纖維細(xì)胞和其他活性成分，保證機體內(nèi)組織相容性，提高皺紋祛除效果。

本申請為申請?zhí)枮椤?01810930860.3”、申請名稱為“一種結(jié)合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑的制備方法”的中國專利申請的分案申請，母案的申請日為2018.08.15。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種結(jié)合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑的制備方法，屬于醫(yī)學(xué)美容技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

皺紋是指皮膚受到外界環(huán)境影響，形成游離自由基，自由基破壞正常細(xì)胞膜組織內(nèi)的膠原蛋白、活性物質(zhì)，氧化細(xì)胞而形成的小細(xì)紋、皺紋。皺紋的發(fā)生歸結(jié)起來有4個原因：自然老化、地心引力作用、陽光中紫外線照射使皮膚發(fā)生光老化與光損傷和面部表情肌過多的收縮。其中面部表情肌過多的收縮產(chǎn)生的皺紋稱動力性皺紋，主要表現(xiàn)為眶外側(cè)的魚尾紋，額頭紋和眉間紋、鼻唇溝紋和唇上紋和頸闊肌紋。除皺有許許多多的辦法，局部外用各種各樣的除皺霜、抗皺霜、防曬霜只能改善外觀，它對皺紋的消除不會有較大的作用。醫(yī)用膠原注射充填術(shù)有效，但因為是非自身物質(zhì)，只能存在幾個月就會被機體清除，同時注射后會有一定的過敏反應(yīng)。

膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，約占膠原纖維固體物的85％，占動物體內(nèi)蛋白質(zhì)總量的25％～30％，它廣泛存在于動物的結(jié)締組織(骨、軟骨、皮膚、腱、韌等)中，對機體和臟器起著支持、保護、結(jié)合，以及形成界隔等作用。人體皮膚下層也有致密排布的膠原蛋白存在，皮膚的厚度和成分會隨著年齡增加而改變，老年人的皮膚很容易受傷，且不易愈合，這很可能是因為上層皮膚成纖維細(xì)胞缺失所致，若能刺激這些細(xì)胞生長，就有可能恢復(fù)皮膚的彈性，同樣還能刺激毛囊形成，減少疤痕。通過自體膠原蛋白注射的方式去除皺紋，能夠顯著減少過敏反應(yīng)，但是單純的膠原蛋白注射容易被機體降解，不能根本性的解決皺紋問題，為此，對現(xiàn)有的醫(yī)用膠原注射填充物進行改進，對提高提高對皺紋的去除效果具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明實施例提供了一種自體膠原蛋白注射劑的制備方法，通過對自體成纖維細(xì)胞進行培養(yǎng)后作為注射填充物，再結(jié)合肉毒桿菌，實現(xiàn)祛除皺紋的作用。具體技術(shù)方案如下：

一種結(jié)合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑的制備方法，包括以下步驟：

步驟一，獲取自體成纖維組織，在常溫下用生理鹽水清洗，將自體成纖維組織剪成小塊，向其中加入磷酸緩沖鹽溶液混合，室溫下離心去除下層液體，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗后再次離心，去除上清液，加入膠原酶，放置于37℃恒溫震蕩箱中30min～60min，再次離心去除上清液，然后加入含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，用細(xì)胞篩過濾后離心去除上清液，再次加入含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，在37℃溫度條件下，5％CO₂恒溫培養(yǎng)；

步驟二，傳代培養(yǎng)，將步驟一的成纖維細(xì)胞每隔2天更換胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，待細(xì)胞生長至80％融合后用胰蛋白酶消化后傳代，在成纖維細(xì)胞生長三代以后，從胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液重取出；

步驟三，膠原蛋白積累，將成纖維細(xì)胞放入無血清培養(yǎng)基，在37℃無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使成纖維細(xì)胞分泌出膠原蛋白；

步驟四，獲取注射劑，將成纖維細(xì)胞和膠原蛋白從無血清培養(yǎng)基中取出，用磷酸緩沖鹽溶液清洗洗去培養(yǎng)基，加入林格氏液、葡萄糖液、肉毒桿菌混合均勻，制成自體膠原蛋白注射劑，4℃保存。