[發明專利]一種結合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑

在審

• 申請號: 202110556399.1
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN113117148A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 白晉
• 申請（專利權）人: 白晉
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/36;A61L27/24;A61L27/50;A61L27/54
• 代理公司: 北京鑫瑞森知識產權代理有限公司 11961
• 代理人: 韓鳳穎

1.一種結合肉毒桿菌的自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，所述自體膠原蛋白注射劑的制備原料，包括：成纖維細胞和膠原蛋白、林格氏液l、葡萄糖液和肉毒桿菌，所述成纖維細胞和膠原蛋白、林格氏液l、葡萄糖液和肉毒桿菌的質量體積比為10g：5ml～20ml：10ml～30ml：5μg～20μg。

2.根據權利要求1所述自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，所述自體膠原蛋白注射劑中還加入有幾丁質。

3.如權利要求2所述自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，每10g成纖維細胞和膠原蛋白中加入幾丁質0.2g～2g。

4.如權利要求3所述自體膠原蛋白注射劑法，其特征在于，所述自體膠原蛋白注射劑中還加入有成纖維細胞生長因子。

5.如權利要求4所述自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，每10g成纖維細胞和膠原蛋白中加入成纖維細胞生長因子2mg～10mg。

6.根據權利要求1～5任一項所述自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，所述成纖維細胞和膠原蛋白的制備方法，包括：

步驟一，獲取自體成纖維組織，在常溫下用生理鹽水清洗，將自體成纖維組織剪成小塊，向其中加入磷酸緩沖鹽溶液混合，室溫下離心去除下層液體，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗后再次離心，去除上清液，加入膠原酶，放置于37℃恒溫震蕩箱中30min～60min，再次離心去除上清液，然后加入含有胎牛血清的DMEM培養液，用細胞篩過濾后離心去除上清液，再次加入含有胎牛血清的DMEM培養液中，在37℃溫度條件下，5％CO₂恒溫培養；

步驟二，傳代培養，將步驟一的成纖維細胞每隔2天更換胎牛血清的DMEM培養液，待細胞生長至80％融合后用胰蛋白酶消化后傳代，在成纖維細胞生長三代以后，從胎牛血清的DMEM培養液重取出；

步驟三，膠原蛋白積累，將成纖維細胞放入無血清培養基，在37℃無血清培養基中培養，使成纖維細胞分泌出膠原蛋白；

步驟四，將成纖維細胞和膠原蛋白從無血清培養基中取出，得到纖維細胞和膠原蛋白。

7.如權利要求6所述自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，在步驟一中，離心速度為1200rpm～3500rpm，離心時間為2min～5min。

8.如權利要求6所述的自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，在步驟二中，胰蛋白酶為質量分數為0.25％的胰蛋白酶。

9.如權利要求6所述自體膠原蛋白注射劑，其特征在于，在步驟三中，成纖維細胞在無血清培養基中培養時間為12h～60h。