[發明專利]一種達肝素鈉分子量的控制方法

有效

• 申請號: 202110554876.0
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113024689B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 胡著陽;徐富勇;林學良;魏超娟;耿衛鋒
• 申請（專利權）人: 江西浩然生物制藥有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 北京睿博行遠知識產權代理有限公司 11297
• 代理人: 申超平

本發明涉及一種達肝素鈉分子量的控制方法。本發明通過一次降解、層析純化、二次降解、還原、脫色及干燥制得達肝素鈉成品。本發明通過一次降解的將分子量控制在6900?7500之間，層析純化之后將再將本應去除的大分子部分進行第二次降解，充分利用了肝素鈉原料，使達肝素鈉收率明顯提高，收率達85%以上。與現有技術相比，本發明方法操作簡單易行，對分子量及分子量分布控制準確，所有工序均在常溫常壓下進行，離子交換工藝易于生產放大，重現性好，具有重要的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種達肝素鈉分子量的控制方法。

背景技術

達肝素鈉是由豬腸粘膜來源的肝素鈉經亞硝酸降解而得到的低分子量肝素的一種，達肝素鈉重均分子量為5600-6400，其分子量小于等于3000的比例不大于13%，分子量大于等于8000的比例為15%-25%。達肝素鈉的還原端結構為6-O-硫酸-2,5-脫水-D-甘露醇，非還原端結構為2-O-硫酸-α-L-艾杜糖醛酸。按干品計每毫克抗Xa因子的效價為110-210IU/mg，抗IIa的效價為35-100IU/mg，抗Xa/抗IIa的活性比值在1.9-3.2之間。達肝素鈉可用于治療急性深靜脈血栓，急性腎功能衰竭或慢性腎功能不全者進行血液透析和血液過濾期間防止在體外循環系統中發生凝血，不穩定型冠狀動脈疾病（如不穩定型心絞痛和非Q-波型心肌梗塞），預防與手術有關的血栓形成。

達肝素鈉是通過亞硝酸控制降解法生產的，該方法的機理是在低pH值條件下，亞硝酸與未分級肝素中的N-硫酸葡糖胺反應使之脫去形成-NH₂，-NH₂與亞硝酸發生重氮化反應，在放出N₂的同時糖苷鍵斷裂，電子轉移，縮環生成2,5-脫氫甘露醛，后者經還原或脫氫形成甘露糖醇。

由于肝素鈉由一系列不同分子量的未分級肝素組成，加入亞硝酸鈉后，不同大小分子量的組分同時降解，造成降解后的肝素分子量及分布不符合達肝素鈉要求，表現為小分子組分遠超出標準，還需要通過進一步純化，去除部分大分子和小分子后，才能得到符合質量標準的產品。達肝素鈉制備工藝的難點為其分子量及分子量分布的控制，分子量及分子量分布是降解和純化工藝協同控制的結果，需嚴格優選降解及純化過程參數，以降低純化難度及提高產品收率，若降解及純化工藝選擇優化不合適，則需要在純化過程中去除較多組分，直接結果就是導致產品收率下降。目前達肝素鈉制備工藝中采用亞硝酸鈉降解后，常用的分子量控制技術有乙醇分級沉淀法、超濾法及層析法。然而上述降解及純化工藝存在操作復雜，成本高的問題。

因此，如何提供一種操作簡便低成本的達肝素鈉分子量及分子量分布的控制方法，以滿足達肝素鈉分子量及分子量分布的控制要求并提高產品收率，成為本領域技術人員亟待解決的技術問題。

發明內容

鑒于現有技術中的降解及純化工藝存在的問題，本發明提供了一種達肝素鈉分子量的控制方法，其操作簡便，生產成本低，能滿足達肝素鈉分子量及分子量分布的控制要求，充分利用肝素鈉原料，提高達肝素鈉制備工藝收率。所述方法包括以下步驟：

（1）一次降解：將肝素鈉溶解后加入亞硝酸鈉進行第一次降解，得第一次降解溶液；

（2）層析純化：將所述第一次降解溶液進行陰離子交換層析，得到洗脫液I及洗脫液II；

（3）二次降解：在所述洗脫液II中加入亞硝酸鈉進行第二次降解，得第二次降解溶液；

（4）還原、脫色及干燥：將所述第二次降解溶液與所述洗脫液I合并后，依次進行還原、脫色及干燥，得達肝素鈉成品。

優選的，所述一次降解，具體包括：

將肝素鈉加入所述肝素鈉9倍重量的純化水進行溶解，再加入所述肝素鈉1倍重量的冰醋酸，然后加入所述肝素鈉重量0.4-0.6%的亞硝酸鈉進行第一次降解，所述第一次降解完成后調pH至7.0-9.0，得第一次降解溶液；所述第一次降解的溫度為20-30℃，所述第一次降解的時間為0.5-1.0h。