[發明專利]用于寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病的LAMP引物及環介導等溫擴增檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202110550322.3
• 申請日: 2021-05-20
• 公開（公告）號: CN113136445B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 張海云;楊秀環;李壹;唐艷榮;張小梅;王雅琴;曹院章;何宏軒
• 申請（專利權）人: 北京市朝陽區動植物疫病預防控制中心(北京市朝陽區農產品質量安全綜合檢測站)
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 劉立國

本發明涉及一種擴增檢測試劑盒，特別涉及一種用于寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病的LAMP引物及環介導等溫擴增檢測試劑盒。本發明研究并開發了寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病環介導等溫擴增檢測方法；該方法基于環介導等溫擴增原理，針對鸚鵡熱衣原體ompA基因設計通用擴增引物，通過調整反應試劑配比及引物組構建反應體系，優化反應時間，只需使用恒溫加熱儀器或者水浴鍋，無需專業人員，30分鐘可以根據反應顯色差異判斷結果，可以檢測包括基因型A、B、C、D、E、F、E/B、M56、WC 9種鸚鵡熱衣原體。大大縮短了實驗的時間并降低了實驗開展的條件，讓基層單位開展寵物疫病的快速診斷變成現實，達到人獸共患衣原體快速診斷的目的。

技術領域

本發明涉及一種擴增檢測試劑盒，特別涉及一種用于寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病的LAMP引物及環介導等溫擴增檢測試劑盒。

背景技術

未來5～10年中國寵物市場將以至少20％的速度增長，目前，我國擁有超過1.5億只寵物狗，養異寵及觀賞鳥等寵物的人群也正在逐漸增加。而中國的寵物診療行業魚龍混雜，寵物健康管理困難等問題突出。

隨著生物技術的不斷發展，研究出了一系列寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病檢測的分子生物學方法。其中主要有PCR技術、熒光定量PCR技術、環介導等溫擴增技術(LAMP)，但在實際應用中并非所有的技術都起到很好的應用效果，其中PCR技術成本低，檢測技術成熟，準確性高，但操作費時費力，一般需要凝膠電泳進行結果判定，檢測周期較長，滿足不了疫病現場快速檢測的目的；熒光定量PCR技術是在PCR反應體系中加入熒光標記探針，利用熒光信號的積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線和對未知模板進行定量分析的方法區分，該檢測技術無需凝膠電泳進行結果判讀，但需要大型熒光定量PCR儀器，同時對樣本質量要求較高，且操作程序較為復雜，對操作人員要求比較高，這限制了該技術在基層的推廣使用。

首先，人畜共患病監測體系薄弱，有數據表明，鴿、鸚鵡等觀賞鳥中發現病例數遠低于人鸚鵡熱感染病例數，不能發揮關口前移的預警作用，二是人獸共患衣原體病例大多數為臨床診斷病例或疑似病例，缺乏實驗室診斷確診技術，相關意識需要加強。三是信息收集、利用尚不充分，部分寵物醫療機構沒有對疫情采取有效地反饋和上報。四是系統收集的信息局限，不能滿足防治的需求，缺乏人獸共患衣原體病的準確數據。因此，作為人獸共患病的檢測和監測，需整合寵物醫療機構，獸醫主管等部門各自優勢，寵物醫療機構在發現寵物人獸共患病后，既可及時通知寵物主，有效控制疫病對人的威脅；又可實現病原檢測信息收集，為主管部門及時、定位、處置突發疫病提供數據基礎。

隨著信息、生物技術發展，我國的動物疫病診斷試劑推陳出新。然而，目前市場上缺乏寵物人獸共患病疫病診斷試劑及配套檢測體系統。且部分企業沒有標準化的診斷試劑GMP生產線，產品質量不穩定，檢測結果無法保障，更沒有配套檢測系統用于數據收集、信息集成，不利于寵物人獸共患病的監測工作。

分子生物學方法特別是PCR、熒光定量PCR技術能特異性地檢測到鸚鵡熱衣原體,以提高鸚鵡熱衣原體病臨床診斷的準確性,然而這些方法普遍存在著操作復雜、費時的問題，且依賴大型儀器(PCR儀、凝膠成像系統)和專業人員，不便于快速檢驗以指導臨床,使該方法在基層推廣造成了極大障礙。環介導等溫擴增技術是日本學者Notomi建立的一種新的核酸等溫擴增技術，自LAMP技術建立以來，該技術已經廣泛應用于對病毒、細菌、寄生蟲等病原菌的檢測研究。LAMP檢測技術根據基層病例零散、設備簡陋，操作人員水品有限等特點，在檢測方法設計上突出簡單、便捷，快速等特性，實現了對未知樣品現場快速篩查技術創新；LAMP檢測技術靈敏度高、特異性強、專利設計抗氣溶膠污染能力強，30分鐘即可完成檢測，完美實現了快速診斷的目的，更加符合寵物臨床診斷的時限要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病的LAMP引物。

本發明的另一目的在于提供一種用于寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病的環介導等溫擴增檢測試劑盒。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：