[發(fā)明專利]用于寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病的LAMP引物及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110550322.3
• 申請日: 2021-05-20
• 公開（公告）號: CN113136445B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張海云;楊秀環(huán);李壹;唐艷榮;張小梅;王雅琴;曹院章;何宏軒
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市朝陽區(qū)動植物疫病預(yù)防控制中心(北京市朝陽區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全綜合檢測站)
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京市盈科律師事務(wù)所 11344
• 代理人: 劉立國

1.一種用于檢測鸚鵡熱衣原體的LAMP引物，其特征在于，該LAMP引物包括：

引物F3：5’-CTAAGCATAATCTTTAGAGGTGAGTATGA-3’，即SEQ ID NO.2，

引物B3：5’-CATAATCTCCGTAGTATCCTGCG-3’，即SEQ ID NO.3，

引物FIP：5’-GGTTCCCTACAGGCAAGGCTAAACTCTTGAAATCGGCATTATTGTT-3’，即SEQ IDNO.4，

引物BIP：5’-TGTGGGAAGGTGCTTCAGGAGGGATGCTAATGGCGTCACA-3’，即SEQ ID NO.5，引物L(fēng)oopF：5’-AGGAGAGAGCGGAACCC-3’，即SEQ ID NO.6，

引物L(fēng)oopB：5’-ATCCTTGCGATCCTTGCG-3’，即SEQ ID NO.7。

2.一種含有權(quán)利要求1所述的LAMP引物的寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括dNTPs、Bst DNA聚合酶、Buffer、Mg²⁺中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括模板DNA。

5.權(quán)利要求1所述的LAMP引物在制備寵物人獸共患鸚鵡熱衣原體病環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于其包括以下步驟：

1)提取樣品中的DNA；

2)以步驟1)中提取的DNA為模板，利用所述LAMP引物進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；

3)分析擴(kuò)增產(chǎn)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于步驟1)中樣本裂解液組成是：25mM tris-HCL、5mM EDTA、0.1％SDS、1％tween-20。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于擴(kuò)增反應(yīng)條件：反應(yīng)時間為30-40分鐘，反應(yīng)溫度為64-65℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于步驟3)具體為：向步驟2)的擴(kuò)增產(chǎn)物中加入SYBR Green I染料，根據(jù)顯色情況判定結(jié)果：顯示熒光綠為陽性，橙色為陰性。