[發(fā)明專利]一種基于腫瘤細胞膜的生物活性制劑及其制備方法與應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2021-05-18
• 公開（公告）號: CN113304269B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 欒玉霞;李倩
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: A61K45/06
• 分類號: A61K45/06;A61K47/61;A61K47/69;A61K9/06;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 李圣梅

1.一種基于腫瘤細胞膜的生物活性制劑，該制劑的藥物活性成分包含CDK5抑制劑和外泌體抑制藥物；

所述生物活性制劑為水凝膠；

所述生物活性制劑由CDK5抑制劑、外泌體抑制藥物和腫瘤細胞膜囊泡制成；

所述腫瘤細胞膜囊泡為海藻酸鈉氧化物修飾的腫瘤細胞膜囊泡；

所述腫瘤細胞膜囊泡尺寸為150~220 nm；

所述CDK5抑制劑為Roscovitine；

所述外泌體抑制藥物為二甲基阿米洛利DMA；

所述Roscovitine與二甲基阿米洛利的質(zhì)量比為1~10：1。

2.如權(quán)利要求1所述的生物活性制劑，其特征在于，所述Roscovitine與二甲基阿米洛利的質(zhì)量比為5:1。

3.一種如權(quán)利要求1所述的基于腫瘤細胞膜的生物活性制劑的制備方法，其特征在于，制備方法包括：

海藻酸鈉氧化物修飾的腫瘤細胞膜囊泡形成凝膠因子，將CDK5抑制劑和外泌體抑制藥物分別溶解后混合均勻形成藥物溶液，加入凝膠因子的水溶液中攪拌處理，即得成膠溶液；

溶解CDK5抑制劑和外泌體抑制劑的溶劑為去離子水；

加入藥物溶液的方法為滴加。

4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，腫瘤細胞膜囊泡由以下方法制備得到：

（1）收集小鼠腫瘤組織，采用勻漿法得到腫瘤單細胞懸液；

（2）探頭超聲得到破碎的腫瘤細胞，采用超濾離心方式進行除雜，后采用梯度離心法提取腫瘤細胞膜；

（3）采用超聲的方式獲得腫瘤細胞膜囊泡。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，腫瘤單細胞懸液通過加入勻漿緩沖液然后研磨獲得，所述勻漿緩沖液是含有蔗糖、EDTA、HEPES-NaOH和蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液；

蔗糖的濃度為0.1~1 mM；

EDTA的濃度為0.5~5 mM；

HEPES-NaOH的濃度為5~30 mM；

蛋白酶抑制劑的濃度為6.5~8.5 mM，pH為7.4；

步驟（2）中，將收集的腫瘤單細胞懸液在低溫下進行探頭超聲，破碎腫瘤細胞，得到破碎的腫瘤細胞；隨后將破碎的腫瘤細胞在低溫下進行中速離心，除去黑色素進行純化，向純化后的破碎細胞懸液在低溫下進行高速離心，得到腫瘤細胞膜沉淀；將腫瘤細胞膜沉淀重新分散后，冷凍保存；

所述低溫為0~6℃，探頭超聲的功率幅度為20~60 %；

探頭超聲時間為5~15 min；

探頭超聲的時間間隔為開：2~6 s；關(guān)：1~4 s；

所述中速離心的轉(zhuǎn)速為2000~4000 g，離心時間為5~20 min；

所述高速離心的轉(zhuǎn)速為10000~20000 g，離心時間為30~90 min；

將細胞膜沉淀重新分散的溶劑為PBS；

步驟（3）中，將腫瘤細胞膜在低溫下采頭超聲的方式進行膜融合，得到腫瘤細胞膜囊泡，所述低溫為0~6℃，超聲時間為30~120 s。

6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，蔗糖的濃度為0.25 mM。

7.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，EDTA的濃度為1 mM。

8.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，HEPES-NaOH的濃度為20 mM。

9.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，探頭超聲的功率幅度為40%。

10.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，探頭超聲時間為10min。

11.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，探頭超聲的時間間隔為開：3 s；關(guān)：7 s。