[發(fā)明專利]一種銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分指紋圖譜的建立方法及其建立的指紋圖譜

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110540716.0
• 申請日: 2021-05-18
• 公開（公告）號: CN113252821B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方同華;王春生;林珊;佟美鴻;劉玉成;姚洪艷;武志立;董麗麗
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司;哈爾濱珍寶制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京瑞恒信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李琰

本發(fā)明提供一種銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分的指紋圖譜建立方法以及通過該方法建立的指紋圖譜。所述指紋圖譜建立方法包括以水仙苷為參照，采用高效液相色譜法檢測銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分的相對保留時(shí)間和/或相對峰面積。所述指紋圖譜包括23個(gè)共有峰。本發(fā)明還提供上述指紋圖譜建立方法和/或建立的指紋圖譜在在銀杏葉提取中間體和/或其制劑的真?zhèn)舞b別和成分檢測中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)和藥物質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體涉及一種銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分指紋圖譜的建立方法及其建立的指紋圖譜。

背景技術(shù)

銀杏葉為銀杏科植物銀杏(Ginkgo?biloba?L.)的干燥葉,性甘、苦、澀、平,歸心、肺經(jīng)，具有斂肺、平喘、活血化瘀、止痛等作用。銀杏葉提取中間體為銀杏葉經(jīng)加工制成的提取物/液,被廣泛應(yīng)用于藥物、保健品、食品添加劑、功能性飲料、化妝品等領(lǐng)域，是現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)開發(fā)的植物藥中最成功的案例之一。舒血寧注射液是由銀杏葉提取中間體經(jīng)加工制成的滅菌水溶液，用于缺血性心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、腦梗死及腦血管痙攣等。

黃酮類成分是銀杏葉提取中間體及其制劑中的最重要的活性成分之一。目前從銀杏葉中分離的黃酮類化合物有40種。為了更好地控制銀杏葉提取中間體及其制劑的質(zhì)量，保證臨床療效和用藥安全，需要建立能夠客觀全面反映真實(shí)世界銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類化合物含量及分布的方法。指紋圖譜是一種綜合的、可量化的質(zhì)量檢測手段，主要用于評價(jià)植物藥(包括中藥材)及其制劑質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)出現(xiàn)了建立銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分指紋圖譜的方法。如中國發(fā)明專利申請CN110824072A(公開日2020年2月21日)公開了一種基于高效液相色譜構(gòu)建銀杏葉提取物或其制劑中黃酮類指紋圖譜的方法；其中高效液相色譜法的色譜條件為：固定相是以苯基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，流動(dòng)相A為體積濃度為0.05-0.2％的甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫，紫外檢測波長為265nm，柱溫25-40℃，流速0.2-0.45ml/min。該方法以蘆丁的色譜峰為參照峰，共標(biāo)定了36個(gè)特征峰，其中18個(gè)峰歸屬為黃酮類成分，3個(gè)峰歸屬為木脂素類成分，1個(gè)峰歸屬為酚酸，其余14個(gè)特征峰未進(jìn)行歸屬。因此，該專利申請文件公開的指紋圖譜并沒有真實(shí)全面反映出銀杏葉提取物或其制劑的黃酮類成分。此外，該方法檢測時(shí)間約為35分鐘(全部出峰)，加上柱平衡時(shí)間，檢測一個(gè)樣品總耗時(shí)將近50分鐘。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分的指紋圖譜建立方法以及所建立的指紋圖譜在銀杏葉提取中間體或其制劑質(zhì)量控制上的應(yīng)用。本發(fā)明提供的基于UPLC-UV的方法，建立了銀杏葉提取中間體或其制劑指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了23個(gè)共有峰，全部為黃酮類化合物，其中22個(gè)峰確定了化學(xué)成分歸屬。經(jīng)檢測，10批樣品與共有模式之間相似度均大于0.9。本發(fā)明的檢測時(shí)間僅為25分鐘(所有23個(gè)色譜峰全部出峰)。本發(fā)明在節(jié)省檢測時(shí)間、有利于生產(chǎn)操作的同時(shí)，提高了銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分的質(zhì)量控制，從而能夠更好地評價(jià)產(chǎn)品的均一性和穩(wěn)定性。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：

一種銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分的指紋圖譜建立方法，包括以水仙苷為參照，采用高效液相色譜法檢測銀杏葉提取中間體或其制劑中黃酮類成分的相對保留時(shí)間和相對峰面積，其中所述高效液相色譜的條件如下：

色譜柱為Agilent?ZORBAX?SB-C18柱，規(guī)格3.0mm×150mm，固定相粒徑1.8μm；

流動(dòng)相由A和B兩相組成，其中A相為乙腈，B相為0.1％(v/v)甲酸水溶液，流速0.23～0.26ml/min，0～25min按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：

0～12min，按照體積百分比，A:B＝18％:82％勻速地變化為A:B＝21％:79％，

12～15min，按照體積百分比，A:B＝21％:79％勻速地變化為A:B＝25％:75％，