[發(fā)明專利]一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110538061.3
• 申請日: 2021-05-18
• 公開（公告）號: CN113376270B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 歐陽械華;馬良;于淑新;劉杰;陳佳;孔宏偉
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州漢庫醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/04;G01N30/34;G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 紹興市寅越專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33285
• 代理人: 堵燁輝

本發(fā)明提供一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒及檢測方法，包括如下，取一定體積的血清樣本，加入到試劑包C中的96孔板蛋白沉淀板孔內(nèi)，加入試劑包A中的一定體積的沉淀劑，渦旋混勻，使用負(fù)壓裝置，將96孔板蛋白沉淀板中樣本轉(zhuǎn)移至96孔板進(jìn)樣板中，進(jìn)樣分析，應(yīng)用超高效液相色譜系統(tǒng)，在硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱上，在特定的流動相組成、流動相梯度、流速和進(jìn)樣體積條件下，實現(xiàn)6種脂溶維生素在硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱上的分離，經(jīng)分離的6種脂溶維生素進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)檢測，正離子模式，特定的離子源參數(shù)及MRM參數(shù)，實現(xiàn)6種脂溶維生素的質(zhì)譜檢測，本發(fā)明提供了一種檢測準(zhǔn)確高效的血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒及檢測方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及質(zhì)譜檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

脂溶維生素是維持身體健康的基本要素，如果沒有足夠的維生素，器官無法正常運作、皮膚快速老化、視力減退等。與脂溶性抗氧化維生素不足的癥狀有免疫功能失調(diào)、反復(fù)感染、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、消化與吸收障礙、心血管疾病、慢性疲勞癥和氧化壓力增加等。平衡與適量的抗氧化維生素濃度有助于防止自由基的傷害及慢性病形成。維生素A有促進(jìn)生長、繁殖，維持骨骼、上皮組織、視力和粘膜上皮正常分泌等多種生理功能，維生素A及其類似物有阻止癌前期病變的作用，缺乏時表現(xiàn)為生長遲緩、暗適應(yīng)能力減退而形成夜盲癥。維生素D還有促進(jìn)皮膚細(xì)胞生長、分化及調(diào)節(jié)免疫功能作用，缺乏維生素D兒童可患佝僂病，成人患骨質(zhì)軟化癥。維生素E具有抗氧化保護(hù)機體細(xì)胞免受自由基的毒害，改善血液循環(huán)、保護(hù)組織、降低膽固醇、預(yù)防高血壓。維生素K1是肝臟合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必須的物質(zhì)，主要用于各種維生素K缺乏引起的出血性疾病的治療，還具有鎮(zhèn)痛、緩解支氣管痙攣的作用，對內(nèi)臟平滑肌絞痛、膽管痙攣、腸痙攣引起的絞痛有明顯的效果。維生素K2具有預(yù)防骨質(zhì)疏松，改善凝血功能等作用。維生素K2中有骨蛋白質(zhì)，可以和鈣生成鈣質(zhì)，從而增加骨密度；維生素K2還能夠促進(jìn)血液中的鈣沉積入骨，還能夠強化肝臟的解毒功能以及利尿，并且還能夠降血壓。脂溶維生素攝入量過多易引起中毒現(xiàn)象，若攝入量過少則緩慢出現(xiàn)缺乏癥狀。

目前，在臨床實驗室中用于血清中脂溶性維生素分析的常用方法有免疫分析法、高效液相色譜法、高效液相色譜法串聯(lián)質(zhì)譜法。與傳統(tǒng)的高效液相色譜法和免疫分析法相比，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有更好的分離能力、更高特異性和更高靈敏度。血清中25-(OH)VD2和VK1含量低，大部分為2ng/mL左右,因此為提高檢測靈敏度，前處理需要液液萃取進(jìn)行富集，同時使用APCI離子源才能實現(xiàn)準(zhǔn)確定量。而ESI離子源是最為常用的電離模式，有的質(zhì)譜儀只配有ESI離子源，同時配備ESI和APCI離子源的儀器，使用過程中針對不同檢測項目，需要兩種離子源進(jìn)行切換。因此目前的檢測方法對儀器提出更高要求。目前檢測方法使用傳統(tǒng)的離心管和進(jìn)樣瓶，離心管和進(jìn)樣瓶的標(biāo)記，離心和液液萃取后兩次樣本轉(zhuǎn)移，均為人工操作，過程繁瑣費時，影響檢測重復(fù)性準(zhǔn)確性的因素較多。

發(fā)明內(nèi)容

(一)解決的技術(shù)問題

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種檢測準(zhǔn)確高效的血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒及檢測方法，解決了上述背景技術(shù)中提出的問題。

(二)技術(shù)方案

為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒，包括作為校準(zhǔn)品制備和樣本制備使用的試劑包A、作為質(zhì)控的試劑包B和作為前處理沉淀蛋白和進(jìn)樣分析使用的試劑包C。

進(jìn)一步的，所述試劑包A為乙醇沉淀劑。

進(jìn)一步的，所述試劑包B包括低質(zhì)控和高質(zhì)控，所述低質(zhì)控和高質(zhì)控均為牛血清白蛋白緩沖液中加入6種脂溶維生素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液制備而成，所述低質(zhì)控濃度控制在線性S3濃度，所述高質(zhì)控濃度控制在線性S5濃度，校準(zhǔn)為6種脂溶維生素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度控制在S1a-S7a之間。

進(jìn)一步的，所述牛血清白蛋白緩沖液中的緩沖液為PBS緩沖液，其pH在7.2～7.4之間,牛血清白蛋白濃度為5％。