[發(fā)明專利]一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測試劑盒及檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110538061.3 | 申請日： | 2021-05-18 |
| 公開（公告）號： | CN113376270B | 公開（公告）日： | 2022-02-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 歐陽械華;馬良;于淑新;劉杰;陳佳;孔宏偉 | 申請（專利權(quán)）人： | 杭州漢庫醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/72;G01N30/04;G01N30/34;G01N30/06;G01N30/88 |
| 代理公司： | 紹興市寅越專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33285 | 代理人： | 堵燁輝 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 血清 中脂溶 維生素 快速 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）維生素A、25-羥基VD2、25-羥基VD3、維生素E、維生素K1和維生素K2的校準(zhǔn)品制備：分別取一定體積的上述6種脂溶維生素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到96孔板蛋白沉淀板孔內(nèi)，加入一定體積超純水，再加入一定體積的乙醇沉淀劑，渦旋混勻，使用負(fù)壓裝置，將96孔板蛋白沉淀板中樣本轉(zhuǎn)移至96孔板進(jìn)樣板中；
（2）樣本制備：取一定體積的血清樣本，加入到96孔板蛋白沉淀板孔內(nèi)，加入一定體積的乙醇沉淀劑，渦旋混勻，使用負(fù)壓裝置，將96孔板蛋白沉淀板中樣本轉(zhuǎn)移至96孔板進(jìn)樣板中，直接進(jìn)樣分析；
（3）超高效液相色譜分離：應(yīng)用超高效液相色譜系統(tǒng)，在硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱上，實現(xiàn)6種脂溶維生素在硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱上的分離，其中硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱具體為Agilent ZORBAX Eclipse Plus C182.1×100mm 1.8 μm，流動相A為0.2mmol/L 氟化銨水溶液，流動相B為0.2mmol/L 氟化銨甲醇溶液，進(jìn)樣體積為10 μL，柱溫為40 ℃，流動相梯度如下表：
時間（min） A相百分比% B相百分比% 0.0 20 80 0.5 20 80 7 0 100 9 0 100 10 20 80
；
（4）串聯(lián)四級桿質(zhì)譜檢測：經(jīng)分離的6種脂溶維生素進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)檢測，質(zhì)譜條件為正離子模式，毛細(xì)管電壓3.00KV，霧化氣溫度500℃，離子源溫度150℃，脫溶劑氣1000L/h，采用MRM模式，每個化合物兩個離子對，分別用于定量和定性，最終實現(xiàn)6種脂溶維生素的質(zhì)譜檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測方法，其特征在于：步驟（1）中的6種脂溶維生素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積為10μL，超純水體積為190μL，乙醇沉淀劑體積為400μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種血清中脂溶維生素質(zhì)譜快速檢測方法，其特征在于：步驟（1）和步驟（2）中渦旋時間為5min。
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