[發(fā)明專利]化學發(fā)光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法

有效

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• 申請日: 2021-05-17
• 公開（公告）號: CN113125740B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設計）人: 馮志山;王慧敏;李冰;王玉堂;李林
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發(fā)明涉及免疫技術檢測領域，特別涉及化學發(fā)光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法。包括：磁珠經活化后和未經活化的發(fā)光強度的檢測，以及活化效率的鑒定；其中，磁珠經活化后發(fā)光強度的檢測：磁珠與EDC、NHS反應，經清洗處理，得到活化后的磁珠；活化后的磁珠與生物素反應，反應產物與洗脫液震蕩，得到磁微粒?生物素；將磁微粒?生物素與鏈霉親和素?發(fā)光標記物反應，得到磁微粒?發(fā)光標記物復合物；將磁微粒?發(fā)光標記物復合物與化學發(fā)光底物反應，檢測發(fā)光強度。采用本發(fā)明鑒定方法可以快速、準確、便捷地鑒定磁微粒活化效率。

技術領域

本發(fā)明涉及免疫技術檢測領域，特別涉及化學發(fā)光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法。

背景技術

化學發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)，是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項最新免疫測定技術。它是用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發(fā)光物質有吖啶酯類化合物，是有效的發(fā)光標記物，其通過起動發(fā)光試劑作用而發(fā)光，強烈的直接發(fā)光在一秒鐘內完成，為快速的閃爍發(fā)光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析，其化學反應簡單、快速、無須催化劑；檢測小分子抗原采用競爭法，大分子抗原則采用夾心法，非特異性結合少，本底低；與大分子的結合不會減小所產生的光量，從而增加靈敏度。

磁微粒化學發(fā)光免疫分析是將磁性分離技術、化學發(fā)光技術、免疫分析技術三者結合起來的一種新興分析方法，該技術充分利用了磁性分離技術的快速易自動化性，化學發(fā)光技術的高靈敏度性，以及免疫分析的特異性，在生物分析領域展現(xiàn)了不可替代的作用。

磁珠種類包括羥基磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠、環(huán)氧基磁珠、NHS磁珠、SA磁珠。羧基磁微粒EDC/NHS活化后產生琥珀酰亞胺酯中間體，其可與氨基標記物進行反應。現(xiàn)有技術中，可以通過直接或間接檢測氨基標記物的含量來反映磁微粒的活化中間體含量，從而對活化效率進行評判。但當使用異魯米諾或氨基化吖啶酯等疏水性小分子氨基標記物進行直接測定時，Merck磁微粒表面由于疏水及孔隙結構會造成小分子氨基標記物的大量吸附，且難以洗脫，從而造成本底較高，影響檢測靈敏度。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種化學發(fā)光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法。該方法通過使用親水性的氨基生物素修飾性PEG(Biotin-PEG-NH2)與活化后磁珠反應，通過生物素鏈霉親合素系統(tǒng)利用化學發(fā)光技術來間接鑒定活化位點的含量。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

本發(fā)明提供了一種化學發(fā)光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法，包括以下步驟：

一、磁珠未經活化的發(fā)光強度的檢測

(1)將磁珠原液進行第一清洗處理4～6次，得到清洗后的磁珠；

(2)清洗后的磁珠與生物素在室溫條件下反應1～4h，反應產物與洗脫液在100～200prm、室溫條件下震蕩12～16h，封閉，得到磁微粒-生物素；

(3)將磁微粒-生物素與鏈霉親和素-發(fā)光標記物反應10～30min，得到磁微粒-發(fā)光標記物復合物；

(4)將磁微粒-發(fā)光標記物復合物與化學發(fā)光底物反應5～15min，檢測發(fā)光強度L₁；

二、磁珠經活化后發(fā)光強度的檢測

(1)將磁珠原液與EDC、NHS在500～700prm、室溫條件下反應1～2h，經第二清洗處理1～3次，得到活化后的磁珠；

(2)活化后的磁珠與生物素在室溫條件下反應1～4h，反應產物與洗脫液在100～200prm、室溫條件下震蕩12～16h，封閉，得到磁微粒-生物素；