[發明專利]化學發光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法

有效

• 申請號: 202110534722.5
• 申請日: 2021-05-17
• 公開（公告）號: CN113125740B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 馮志山;王慧敏;李冰;王玉堂;李林
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種化學發光免疫分析技術中磁微粒活化效率的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

一、磁珠未經活化的發光強度的檢測

（1）將磁珠原液進行第一清洗處理4~6次，得到清洗后的磁珠；

（2）清洗后的磁珠與生物素Biotin-PEG-NH₂在室溫條件下反應1~4h，反應產物與洗脫液在100~200prm、室溫條件下震蕩12~16h，封閉，得到磁微粒-生物素；

（3）將磁微粒-生物素與鏈霉親和素-發光標記物反應10~30min，得到磁微粒-發光標記物復合物；

（4）將磁微粒-發光標記物復合物與化學發光底物反應5~15min，檢測發光強度L₁；

二、磁珠經活化后發光強度的檢測

（1）將磁珠原液與EDC、NHS在500~700prm、室溫條件下反應1~2h，經第二清洗處理1~3次，得到活化后的磁珠；

（2）活化后的磁珠與生物素Biotin-PEG-NH₂在室溫條件下反應1~4h，反應產物與洗脫液在100~200prm、室溫條件下震蕩12~16h，封閉，得到磁微粒-生物素；

（3）將磁微粒-生物素與鏈霉親和素-發光標記物反應10~30min，得到磁微粒-發光標記物復合物；

（4）將磁微粒-發光標記物復合物與化學發光底物反應5~15min，檢測發光強度L₂；

三、活化效率的鑒定

將發光強度L₁、發光強度L₂與生物素Biotin-PEG-NH₂梯度樣本濃度擬合定標曲線，然后采用四參數lin/log進行擬合，將發光強度帶入擬合曲線，求出同一羧基磁珠上偶聯的生物素Biotin-PEG-NH₂含量，從而判斷不同實驗條件間活化效率的高低。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述鏈霉親和素-發光標記物為SA-HRP或SA-吖啶酯。

3.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述第一清洗處理所用洗滌緩沖液為PBS緩沖液或Tis-HCl緩沖液；

所述PBS緩沖液的pH值為5.0~8.0，濃度為0.05M~0.1M；

所述Tis-HCl緩沖液的pH值為7.0~9.0，濃度為0.05M~2M。

4.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述第二清洗處理所用洗滌緩沖液為PBS緩沖液、醋酸/醋酸鈉緩沖液、2-(N-馬林)乙磺酸-水合物緩沖液中的一種；

所述PBS緩沖液的pH值為5.0~8.0，濃度為0.05M~0.1M；

所述醋酸/醋酸鈉緩沖液的pH值為4.0~9.0，濃度為0.05M~0.1M；

所述2-(N-馬林)乙磺酸-水合物緩沖液的pH值為4.0~9.0，濃度為0.05M~0.1M。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的鑒定方法，其特征在于，所述洗脫液選自吐溫-20緩沖液、Tritonx-100緩沖液、SDS緩沖液、甘氨酸緩沖液、賴氨酸緩沖液、精氨酸緩沖液、鹽酸胍緩沖液、尿素緩沖液中的一種；

吐溫-20緩沖液的質量體積百分濃度為0.005%~5%；

Tritonx-100緩沖液的質量體積百分濃度為0.005%~5%；

SDS緩沖液的質量體積百分濃度為0.005%~5%；

甘氨酸緩沖液的質量體積百分濃度為5%~20%；

賴氨酸緩沖液的質量體積百分濃度為5%~20%；

精氨酸緩沖液的質量體積百分濃度為5%~20%；

鹽酸胍緩沖液的質量體積百分濃度為5%~20%；

尿素緩沖液的質量體積百分濃度為5%~20%。