[發明專利]一種快速提取及檢測奶酪中酪胺含量的方法

在審

• 申請號: 202110532762.6
• 申請日: 2021-05-17
• 公開（公告）號: CN113030348A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 徐斐;袁敏;陳楚翹;葉泰;曹慧
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;C08F220/56;C08F222/38
• 代理公司: 北京迎碩知識產權代理事務所(普通合伙) 11512
• 代理人: 錢揚保;張群峰

本發明提供了一種快速提取及檢測奶酪中酪胺含量的方法，包括如下步驟：步驟一、取適量奶酪碎于離心管中，加入三氯乙酸?鹽酸溶液，混勻獲得樣品懸濁液；步驟二、將樣品懸濁液超聲，離心，取上清液通過抽濾膜抽濾，得到濾液；步驟三、取適量濾液進行電膜萃取，獲得提取液；步驟四、取適量提取液，加入單胺氧化酶、辣根過氧化物酶和顯色劑，反應得到待測溶液；步驟五、對待測溶液測定吸光度值，根據吸光度值計算酪胺含量。本方法具有以下優點：1)操作過程簡單，易于重復；2)減少了復雜樣品中的基質效應；3)提取液中酪胺的富集倍數高，可達30倍左右；4)整個奶酪中酪胺的提取和檢測過程可以在40min內得到結果。

技術領域

本發明屬于食品檢測領域，具體涉及一種奶酪中酪胺的快速提取以及酪胺含量的快速檢測方法。

背景技術

生物胺是一類具有生物活性的小分子含氮有機化合物，是由游離氨基酸的脫羧或醛和酮的胺化或轉胺作用形成的，生物體自身合成的適量生物胺在人體內發揮著重要的生理作用，但過量攝入外源性生物胺嚴重危害人體健康。生物胺廣泛存在于天然食物中和人體組織，同時食品加工過程會造成不同程度的生物胺累積。在發酵食品例如奶酪中，生物胺含量由于微生物的活動而增加，會對代謝過程造成負面影響，其中含量最高的是酪胺，其次是組胺。組胺是生物胺中毒性最強的一種胺，對人體食用高濃度的組胺會導致各種癥狀，包括惡心、嘔吐、腹瀉、紅疹、口腔灼熱感和皮膚瘙癢等。

目前食品分析中檢測面臨基質復雜且干擾物眾多、待測物質濃度低等問題，而傳統的樣品前處理方法由于操作繁瑣耗時，有機溶劑消耗量大，靈敏度低等已不能滿足現代分析發展的需要。

電膜萃取是基于液液微萃取基礎上提出的新型前處理方法，通過運用電勢差作為驅動力，促使離子化待測物從供體相溶液中通過支撐液膜萃取進入接受相溶液，實現待測物凈化富集的目的。自提出以來，電膜萃取主要運用于復雜基質中痕量藥物的萃取，但隨著該方法不斷發展，已大量運用于食品檢測領域。

目前傳統電膜萃取的支撐液膜大多是多孔內嵌式材料，但前期準備及中空纖維膜的浸潤與封口以及有機溶劑的去除等步驟煩瑣耗時，不利于食品快速檢測領域的發展。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷，而提供一種操作簡單的快速提取奶酪中酪胺并快速檢測酪胺含量的方法。本發明的目的可以通過以下技術方案來實現。

根據本發明的第一方面，首先提供一種電膜萃取裝置，該裝置包括：載體室、電源裝置、支撐板和支撐液膜管，載體室中盛放供體相溶液，支撐板設置在載體室中部，支撐板設有兩處通孔，通孔一用于插入正電極，通孔二用于插入支撐液膜管，支撐液膜管下部為支撐液膜，上部盛有接受相溶液，接受相溶液中插入負電極。

優選情況下，載體室中設有磁力轉子，底部設有磁力攪拌器。

具體情況下，所述支撐液膜管采用聚丙烯酰胺凝膠液膜作為支撐液膜，通過以下方法制備：

步驟1、取兩端開口內徑為5-10mm的聚丙烯管，切割至長度40-70mm；

步驟2、用封口膜將聚丙烯管一端封住，將此端朝下放置于離心管架中；

步驟3、稱取適量丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺溶于超純水中，混勻，配置成Acr-Bis溶液待用；

步驟4、稱取過硫酸銨溶于超純水中，混勻形成過硫酸銨溶液；

步驟5、依次在試管中加入Acr-Bis溶液、超純水、過硫酸銨溶液、四甲基乙二胺，混勻，得到凝膠制備液；

步驟6、移液槍吸取凝膠制備液，快速加入聚丙烯管中；

步驟7、待管內溶液凝固后，將其作為支撐液膜管用于電膜萃取。

優選情況下，所述步驟3中，丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺的質量比例為25-30:1；超純水預先用鹽酸調節pH＝1-2。