[發明專利]一種王老吉涼茶濃縮汁UPLC指紋圖譜的建立方法及其檢測方法

有效

• 申請號: 202110529640.1
• 申請日: 2021-05-14
• 公開（公告）號: CN113295789B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 張豐源;葉文才;徐文流;翁少全;王英;鄭榮波;范春林;李詞周;熊煜;楊方明;王艷芳
• 申請（專利權）人: 廣州王老吉大健康產業有限公司;王老吉大健康產業（梅州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 凌日紅

1.一種王老吉涼茶濃縮汁UPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于，包含如下步驟：

S1、對照品溶液的配制：分別精密稱取對照品丹參素、原兒茶酸、新綠原酸、15-去甲基雞蛋花苷、綠原酸、裂環馬錢苷、咖啡酸、海芒果酸B、mesonolic acid D、異迷迭香酸苷、異綠原酸B、異綠原酸C、迷迭香酸和異綠原酸A，加入30～50％甲醇溶解，配制成0.03～0.06mg/mL的溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得；

S2、供試品溶液的配制：取王老吉涼茶濃縮汁10～20mL，5000r/min離心15min，取離心后上清液5-10mL，加入15～30mL甲醇稀釋沉淀，以5000r/min再次離心，上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得；

S3、高效液相色譜法測定：分別精密吸取步驟S1制得的對照品溶液和步驟S2制得的供試品溶液，注入超高效液相色譜儀測定，得到具有共有特征峰的王老吉涼茶濃縮汁指紋圖譜；所述超高效液相色譜儀測定條件包括：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠；柱溫：柱溫為25～35℃；流動相：體積濃度為0.08～0.12％的甲酸水溶液為流動相A，乙腈為流動相B；流速：0.2～0.5mL/min；進樣量：1～5μL；檢測波長：210～280nm；還包括：按下列洗脫程序進行洗脫：0-6分鐘時，流動相B體積百分比由5％上升至7％；6-7分鐘時，流動相B體積百分比由7％下降至5％；7-12分鐘時，流動相B體積百分比由5％上升至8％；12-15分鐘時，流動相B體積百分比由8％上升至13％；15-32分鐘時，流動相B體積百分比由13％上升至18％。

2.如權利要求1所述的建立方法，其特征在于，步驟S3中所述的共有特征峰為14個，分別為：1號-丹參素，2號-原兒茶酸，3號-新綠原酸，4號-15-去甲基雞蛋花苷，5號-綠原酸，6號-裂環馬錢苷，7號-咖啡酸，8號-海芒果酸B，9號-mesonolic acid D，10號-異迷迭香酸苷，11號-異綠原酸B，12號-異綠原酸A，13號-迷迭香酸，14號-異綠原酸C。

3.如權利要求2所述的建立方法，其特征在于，以9號mesonolic acid D為參照峰，各特征峰的相對保留時間在規定值的±10％之內，各峰的規定值分別為：0.13、0.16、0.21、0.24、0.40、0.47、0.53、0.60、1.00、1.16、1.20、1.25、1.40和1.43。

4.如權利要求2所述的建立方法，其特征在于，以9號mesonolic acid D為參照峰，各特征峰的相對峰面積在規定值的±20％之內，各峰的規定值分別為：0.53、0.13、0.40、0.19、0.46、0.11、0.64、0.32、1.00、0.11、0.24、0.21、0.42和0.19；分別構建得到由上述共有特征峰構成的UPLC指紋圖譜。

5.一種王老吉涼茶濃縮汁UPLC指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的配制：分別精密稱取對照品丹參素、原兒茶酸、新綠原酸、15-去甲基雞蛋花苷、綠原酸、裂環馬錢苷、咖啡酸、海芒果酸B、mesonolic acid D、異迷迭香酸苷、異綠原酸B、異綠原酸C、迷迭香酸和異綠原酸A，加入30～50％甲醇溶解，配制成0.03～0.06mg/mL的溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得；

(2)供試品溶液的配制：取王老吉涼茶濃縮汁10～20mL，5000r/min離心15min，取離心后上清液5-10mL，加入15～30mL甲醇稀釋沉淀，以5000r/min再次離心，上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得；

(3)高效液相色譜法測定：分別精密吸取步驟S1制得的對照品溶液和步驟S2制得的供試品溶液，按照權利要求1所述色譜條件進行檢測，將檢測得到的供試品溶液色譜圖與權利要求1的建立方法得到的指紋圖譜比較，計算相似度，對王老吉涼茶濃縮汁UPLC的質量進行評價。