[發明專利]用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 202110523665.0
• 申請日: 2021-05-13
• 公開（公告）號: CN113088516A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 張幫周;何劍全;羅旌萬;肖傳興;林愛強;楊璐溪
• 申請（專利權）人: 張幫周
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129
• 代理人: 殷康明

本發明公開了一種用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒及提取方法，屬于分子生物學核酸提取領域，用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒包括除雜液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脫液E，除雜液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脫液E依次加入試管中與糞便微生物相反應，以提取DNA。與此相應，一種用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒的提取方法，按除雜步驟、裂解步驟、漂洗步驟以及洗脫步驟依次執行。本發明公開的用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒及提取方法，不僅能夠有效地去除糞便中的腐殖酸、多糖、多酚、色素等PCR抑制劑，而且能夠方便、經濟、快捷地得到純度高、回收率高、完整性好的DNA。

技術領域

本發明涉及分子生物學核酸提取領域，尤其涉及一種用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒及提取方法。

背景技術

近年來關于腸道菌群的研究不斷涌現，腸道菌群在人類健康中的作用也越來越得到人們關注。腸道菌群是人體腸道的正常微生物，種類繁多，數目眾多。據估算，一個正常成人體內，腸道細菌總重量可達1～1.5kg。它們能夠影響體重和消化能力，抵御感染和自身免疫疾病的患病風險，除此之外，還與一些內分泌代謝性疾病、腎臟疾病、神經性疾病、心血管疾病、呼吸系統疾病以及癌癥的發生具有密切關聯。

因此研究腸道菌群響的特別重要，通過查看宿主腸道菌群狀態可以判斷宿主健康情況或與疾病的關系，并可據此提供改善或治療的方案。當前主要通過16S rDNA或宏基因組研究腸道菌群分布情況或變化情況，所以獲取腸道菌群核酸DNA是后續研究的基礎。但是，目前傳統的核酸提取方法步驟繁瑣、耗時，市售的糞便微生物基因組DNA提取試劑盒價格高，所以提供一種操作簡單易行、成本低、提取效果好的試劑盒可以大大的提高對腸道菌群的研究范圍。

發明內容

為了克服現有技術的缺陷，本發明所要解決的技術問題在于提出一種用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒，可有效地去除糞便中的腐殖酸、多糖、多酚、色素等PCR抑制劑，使醫護工作者通過本申請的DNA提取試劑盒可以便捷高效地提取糞便微生物基因組DNA，有助于醫護工作者對腸道菌群進行研究，為后續PCR或高通量建庫提供質量保證。

與此相應，本發明另一個所要解決的技術問題在于提出一種用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒的提取方法，按除雜步驟、裂解步驟、漂洗步驟以及洗脫步驟依次執行，使醫護工作者通過本方法簡單便捷地實現核酸提取，操作簡單易行，提取效果可靠優良。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供的一種用于糞便微生物基因組的DNA提取試劑盒，包括除雜液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脫液E，除雜液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脫液E依次加入試管中與糞便微生物相反應，以提取DNA，除雜液A包括以下物質：CTAB、EDTA、PVP30、NaCl、TritonX-100、Tween-20、檸檬酸以及檸檬酸鈉；裂解液B包括以下物質：鹽酸胍、CTAB、PVP30、檸檬酸以及檸檬酸鈉。

本發明優選的技術方案在于，在除雜液A中，CTAB的質量比范圍配置為1～3％m/m，EDTA的體積摩爾濃度范圍配置為20～30mM，PVP30的質量比范圍配置為1～3％m/m，NaCl的體積摩爾濃度范圍配置為1.5～2.0M，TritonX-100的體積比范圍配置為1～3％v/v，Tween-20的體積比范圍配置為0.5～1％v/v，檸檬酸的體積摩爾濃度范圍配置為0.1～0.5M，檸檬酸鈉的體積摩爾濃度范圍配置為0.2～1M，除雜液A的pH范圍配置為4.0～4.5。

本發明優選的技術方案在于，在裂解液B中，鹽酸胍的體積摩爾濃度范圍配置為4～6M，CTAB的質量比范圍配置為0.5～1.5％m/m，PVP30的質量比范圍配置為0.5～1.5％m/m，檸檬酸的體積摩爾濃度范圍配置為0.1～0.5M，檸檬酸鈉的體積摩爾濃度范圍配置為0.2～1M，裂解液B的pH范圍配置為4.0～4.5。

本發明優選的技術方案在于，漂洗液C包括以下物質：鹽酸胍、NaCl以及無水乙醇。