[發(fā)明專利]一種基于納米復(fù)合材料檢測1,5-脫水葡萄糖醇的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110521986.7
• 申請日: 2021-05-13
• 公開（公告）號: CN113203783A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李桂銀;陳敏;黃金丹;梁晉濤;周治德;吳冠雄
• 申請（專利權(quán)）人: 桂林電子科技大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/49;C12Q1/00
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112
• 代理人: 劉梅芳

一種基于納米復(fù)合材料檢測1,5?AG的方法，以吡喃糖氧化酶(PROD)為識別分子，PROD與1,5?AG的特異性結(jié)合，形成一種RGO?CMCS?Hemin/Pt NPs納米復(fù)合材料。再基于該材料良好電子傳遞效應(yīng)和優(yōu)異的催化性能，構(gòu)建一種能對1,5?AG特異性識別和定量分析的電化學(xué)生物傳感器。該方法具有較低的檢測限，能達(dá)到0.0384mg/mL。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種基于納米復(fù)合材料檢測1,5-脫水葡萄糖醇的方法。

背景技術(shù)

目前檢測1,5-脫水葡萄糖醇（1,5-AG）的方法有全酶法，反相色譜法，液質(zhì)聯(lián)用分析法（LC/MS)，酶聯(lián)免疫法（ELISA)等。公開號為CN 108918447A的發(fā)明專利，涉及了一種基于QCM的檢測1,5-AG的傳感器及檢測方法，但該方法對石英晶振片的處理過程復(fù)雜。公開號為CN 110702676A的發(fā)明專利，涉及了一種1,5-AG的檢測試劑盒及方法，通過選擇適宜的方法和穩(wěn)定劑使試劑R1和試劑R2在高葡萄糖濃度的干擾下保持穩(wěn)定，通過吡喃糖氧化酶法測定人體血清樣本中的1,5-AG含量；但該方法操作復(fù)雜，成本較高。因此，需要開發(fā)一種簡便、快速檢測1,5-AG的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種基于還原性氧化石墨烯-羧甲基殼聚糖-血紅素/納米鉑（RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs）的納米復(fù)合材料構(gòu)建電化學(xué)傳感器，實現(xiàn)1,5-AG檢測的方法。

為了解決該技術(shù)問題，利用一步還原法制備RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料，采用層層自組裝方式將RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料和1,5-AG在吡喃糖氧化酶（PROD）固定在修飾納米金的絲網(wǎng)印刷電極表面，構(gòu)建了基于RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs的電化學(xué)生物傳感器。1,5-AG在PROD的催化作用下，生成1,5-脫水果糖和過氧化氫(H₂O₂)，H₂O₂再次被RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料催化分解為H₂O和O₂，產(chǎn)生明顯的電流響應(yīng)信號，采用電化學(xué)工作站的差分脈沖伏安法（DPV）記錄該峰電流，然后根據(jù)1,5-AG濃度和傳感器的響應(yīng)電流關(guān)系繪制出工作曲線，實現(xiàn)對1,5-AG的電化學(xué)檢測。

本發(fā)明按以下步驟進(jìn)行：

步驟1：RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料的制備

（1）還原性氧化石墨烯（RGO）的制備

稱取單層氧化石墨烯（GO）置于蒸餾水中混勻，加入抗壞血酸（AA）進(jìn)行還原，得還原性氧化石墨烯（RGO）。

（2）RGO-CMCS的制備

在RGO溶液中加入羧甲基殼聚糖溶液，超聲混勻，得RGO-CMCS分散液。

（3）RGO-CMCS-Hemin的制備

在RGO-CMCS分散液加入氯化血紅素，攪拌混勻，得到還原性氧化石墨烯-羧甲基殼聚糖-血紅素（RGO-CMCS-Hemin）溶液。

（4）RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料制備

在RGO-CMCS-Hemin分散液中加入氯鉑酸鈉和抗壞血酸，攪拌并離心洗滌，即得到RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料。

步驟2：電化學(xué)傳感界面的構(gòu)建

(1)將絲網(wǎng)印刷電極（SPCE）置于稀硫酸溶液中活化。

(2)將活化后的SPCE置入氯金酸溶液中，進(jìn)行恒電位沉積，得到Au NPs/SPCE。

(3)在Au NPs/SPCE電極上滴加RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs復(fù)合材料懸濁液孵育，洗滌晾干，得到RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE。