[發明專利]一種基于納米復合材料檢測1,5-脫水葡萄糖醇的方法

在審

• 申請號: 202110521986.7
• 申請日: 2021-05-13
• 公開（公告）號: CN113203783A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 李桂銀;陳敏;黃金丹;梁晉濤;周治德;吳冠雄
• 申請（專利權）人: 桂林電子科技大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/49;C12Q1/00
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 劉梅芳

1.一種RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs納米復合材料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）稱取6mg氧化石墨烯，置于蒸餾水中定容至60 mL，使用超聲細胞破碎儀超聲1 h使其充分溶解均勻，制成 0.1 mg/mL的GO水溶液；加入10 mg 抗壞血酸，攪拌還原20 h，即得RGO溶液；

（2）加入20mg CMCS到RGO溶液中，超聲破碎30min，獲得混合均勻的RGO-CMCS分散液；

（3）在RGO-CMCS溶液加入10mL 1mg/mL的Hemin溶液，超聲破碎 1h使其充分混勻，得到RGO-CMCS-Hemin分散液；

（4）在RGO-CMCS-Hemin分散液中加入4ml 0.01mg/mL的氯鉑酸鈉，邊攪拌邊加入抗壞血酸10mg，攪拌20h，得到RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs懸濁液；

（5）離心洗滌，并于70℃干燥，即得 RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs納米復合材料。

2.一種基于權利要求1所述的納米復合材料檢測1,5-AG的方法，其特征在于，按以下步驟進行：

步驟一：電化學生物傳感界面的構建

（1）絲網印刷電極在使用前首先浸泡在0.5 mol/L H₂SO₄ 溶液中進行循環伏安（CV）掃描，在-0.4V—1.0V的電壓范圍內掃描20圈；掃描完成之后用水洗凈，干燥，得到活化的SPCE；

（2）將活化后的SPCE電極放入10mL 0.01%氯金酸溶液，在-0.4V恒電位沉積120s，洗滌吹干，得到Au NPs/SPCE；

（3）將Au NPs/SPCE電極用2.5%戊二醛浸泡15min，用pH為7.4 PBS洗滌吹干，然后滴加6μL的RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs懸濁液，孵育60 min，PBS洗滌，晾干，得RGO-CMCS-Hemin/PtNPs/Au NPs/SPCE；

（4）將3μL PROD滴加到RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE界面上，孵育3h，洗滌未能固定到界面的PROD，自然晾干，得到PROD/RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE傳感界面；

步驟二：1,5-AG工作曲線的繪制

（1）在PROD/RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE傳感界面滴加3μL 1,5-AG溶液，37℃溫度下孵育30min，用pH值7.4的PBS溶液和蒸餾水交替洗滌并吹干，得到1,5-AG/PROD/RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE；

（2）將1,5-AG/PROD/RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE置于濃度為 0.2 mol/L，pH值為7.4的PBS緩沖液中，采用電化學工作站的DPV掃描，記錄其峰值電流；1,5-AG的濃度從0.1 mg/mL到2 mg/mL內，傳感器的電流響應值與1,5-AG的濃度呈線性關系，Y為電流峰電位響應強度，X為1,5-AG濃度，線性方程Y=4.01372+2.18401X；

步驟三：實際血清樣本中1,5-AG的檢測

（1）將正常人血清樣本以1:1的比例分別與0.5 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL的1,5-AG標準溶液充分混合，制成混合液；

（2）分別滴加3 μL上述混合液到PROD/RGO-CMCS-Hemin/Pt NPs/Au NPs/SPCE表面形成工作電極；按照步驟3所述，將工作電極置于PBS緩沖液中，采用DPV進行掃描，記錄其電流值；

（3）根據步驟3的標準曲線，計算可得到對應的實際血清樣本中1,5-AG的濃度。