[發明專利]經過反密碼子編輯的tRNA作為分子開關在精準控制蛋白表達及病毒復制中的應用在審
| 申請號： | 202110516652.0 | 申請日： | 2021-05-12 |
| 公開（公告）號： | CN113308463A | 公開（公告）日： | 2021-08-27 |
| 發明（設計）人： | 湯艷東;蔡雪輝 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心） |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12N15/85;C12P21/00;C12N7/00 |
| 代理公司： | 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139 | 代理人： | 馬鑫 |
| 地址： | 150009 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 經過 密碼子 編輯 trna 作為 分子 開關 精準 控制 蛋白 表達 病毒 復制 中的 應用 | ||
1.經過反密碼子編輯的tRNA作為分子開關在精準控制蛋白表達或病毒復制中的應用，其中，所述的蛋白的編碼基因中一個或多個正常氨基酸編碼基因被提前終止密碼子所替換；所述的病毒為復制缺陷型病毒，該病毒基因組中的必須基因中的一個或多個正常氨基酸編碼基因被提前終止密碼子所替換，自身無法進行復制；所述的經過反密碼子編輯的tRNA攜帶正常氨基酸，同時能夠識別所述的提前終止密碼子，并將攜帶的氨基酸插入到相應的位置，從而使得所述的蛋白以及復制缺陷型病毒在經過反密碼子編輯的tRNA存在下完成表達及復制。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的蛋白或復制缺陷型病毒基因組中的必須基因中的兩個以上正常氨基酸編碼基因被提前終止密碼子所替換。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的經過反密碼子編輯的tRNA選自以下tRNA中的一種或者二者的組合：
(1)ArgUGA tRNA，該tRNA攜帶精氨酸，同時能夠識別提前終止密碼子UGA，并將攜帶的精氨酸插入到相應的位置，其是由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列轉錄后得到；
(2)GlyUGAtRNA，該tRNA攜帶甘氨酸，同時能夠識別提前終止密碼子UGA，并將攜帶的甘氨酸插入到相應的位置，其是由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列轉錄后得到。
4.一種經過反密碼子編輯的tRNA，其特征在于，所述的經過反密碼子編輯的tRNA選自以下tRNA中的一種或者二者的組合：
(1)ArgUGA tRNA，該tRNA攜帶精氨酸，同時能夠識別提前終止密碼子UGA，并將攜帶的精氨酸插入到相應的位置，其是由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列轉錄后得到；
(2)GlyUGAtRNA，該tRNA攜帶甘氨酸，同時能夠識別提前終止密碼子UGA，并將攜帶的甘氨酸插入到相應的位置，其是由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列轉錄后得到。
5.一種表達載體，其特征在于，所述的載體中含有1至多個拷貝的權利要求4所述的經過反密碼子編輯的tRNA。
6.一種應用于蛋白表達精準調控或復制缺陷型病毒復制的細胞系，其特征在于，所述的細胞系中含有并穩定表達1至多個拷貝的權利要求4所述的經過反密碼子編輯的tRNA。
7.如權利要求6所述的細胞系，其特征在于，所述的細胞系還含有EGFP基因，所述的EGFP基因中的一個或多個正常氨基酸編碼基因被提前終止密碼子所替換。
8.如權利要求7所述的細胞系，其特征在于，ArgUGAtRNA存在的情況下，所述的EGFP基因中第74、110、123或169位精氨酸編碼基因中的至少一個被提前終止密碼子所替換，GlyUGAtRNA存在的情況下，所述的EGFP基因中第25、34、92或128位甘氨酸編碼基因中的至少一個被提前終止密碼子所替換。
9.權利要求5所述的表達載體在精準控制蛋白表達或病毒復制中的應用。
10.權利要求6-9任一項所述的細胞系在在精準控制蛋白表達或病毒復制中的應用。
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