[發(fā)明專利]個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110514605.2
• 申請(qǐng)日: 2021-05-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112972666B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉明錄;張傳鵬;馮建海;強(qiáng)邦明;王立新;韓慶梅;金海鋒;盧永燦;王亮;李希鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61P35/00;A61P35/04;C12N5/10;C12N15/62;C12N15/864;C07K19/00
• 代理公司: 山東華君知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37300
• 代理人: 武歡歡

本發(fā)明提供個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法，所述制備方法，包括篩選腫瘤患者的抗原位點(diǎn)；所述篩選腫瘤患者的抗原位點(diǎn)，包括全基因的突變位點(diǎn)的篩選和腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選；將全基因的突變位點(diǎn)的篩選得到的突變多肽、腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選得到的腫瘤抗原表位進(jìn)行連接，得到突變肽，連接時(shí)，腫瘤抗原表位在前，突變多肽在后；在突變肽的N端連接MHC I類信號(hào)分子，在C端連接MHC I類轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)MITD，MITD與增強(qiáng)型細(xì)胞因子GM?CSF連接，得到重組抗原肽片段；本發(fā)明提供的高效的個(gè)性化腫瘤DC疫苗，與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)后，IFN?γ的釋放量、CD8⁺T細(xì)胞數(shù)量、CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量明顯提高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種腫瘤DC疫苗及其制備方法，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

癌癥是全球第二大死亡原因。在全球范圍內(nèi)，每6例死亡中就有1例死于癌癥。對(duì)于早期沒(méi)有擴(kuò)散到淋巴結(jié)和沒(méi)有轉(zhuǎn)移的癌癥，手術(shù)切除是一種非常有效的治療方法。然而，對(duì)于更嚴(yán)重的病例，使用標(biāo)準(zhǔn)的、非特異性的癌癥治療，比如化療和放療，會(huì)對(duì)體內(nèi)的健康細(xì)胞產(chǎn)生影響并形成毒性。由于癌癥的分子異質(zhì)性，通常只有不到25%的接受治療的個(gè)體從批準(zhǔn)的治療中獲益。

目前以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略，主要有5種。一是通過(guò)腫瘤細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC，得到腫瘤DC疫苗，如CN102793912A、CN104815323A。二是利用腫瘤抗原肽沖擊DC，得到腫瘤DC疫苗。三是利用水溶性蛋白質(zhì)作為抗原沖擊DC，得到腫瘤DC疫苗。四是采用腫瘤抗原DNA/RNA負(fù)載到DC細(xì)胞中，得到腫瘤DC疫苗，如CN107583042A、CN102153658A。五是利用腫瘤抗原在體內(nèi)沖擊DC，得到腫瘤DC疫苗。由于每個(gè)患者腫瘤的特異性抗原尚未明確且易發(fā)生抗原位點(diǎn)變異,另外腫瘤細(xì)胞株在體外傳代過(guò)程中表面抗原可能發(fā)生改變,DC細(xì)胞不能將該腫瘤的所有抗原有效呈遞給效應(yīng)T細(xì)胞,從而限制了效應(yīng)T細(xì)胞在體內(nèi)的抗腫瘤效應(yīng)。

目前腫瘤抗原DNA/RNA沖擊DC，主要利用的是腫瘤中已經(jīng)公開(kāi)的相關(guān)抗原，而沒(méi)有針對(duì)每個(gè)患者的腫瘤特異性。基于患者個(gè)性化治療的個(gè)體化藥物被認(rèn)為是解決藥物研發(fā)創(chuàng)新低療效、高成本的潛在解決方案。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供一種高效的個(gè)體化腫瘤DC疫苗，實(shí)現(xiàn)以下發(fā)明目的：

制備針對(duì)患者腫瘤的個(gè)體化特異性疫苗，與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)后，IFN-γ的釋放量、CD8⁺ T細(xì)胞數(shù)量、CD4⁺ T細(xì)胞數(shù)量明顯提高。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：

個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法，所述制備方法，包括篩選腫瘤患者的抗原位點(diǎn)；所述篩選腫瘤患者的抗原位點(diǎn)，包括全基因的突變位點(diǎn)的篩選和腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選；將全基因的突變位點(diǎn)的篩選得到的突變多肽、腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選得到的腫瘤抗原表位進(jìn)行連接，得到突變肽，在突變肽的N端連接MHC I類信號(hào)分子，在C端連接MHC I類轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)MITD，MITD通過(guò)T2A與增強(qiáng)型細(xì)胞因子GM-CSF連接，得到重組抗原肽片段；將全基因的突變位點(diǎn)的篩選得到的突變多肽、腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選得到的腫瘤抗原表位進(jìn)行連接時(shí)，腫瘤抗原表位在前，突變多肽在后進(jìn)行連接。

以下是對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)：

所述全基因的突變位點(diǎn)的篩選，穿刺抽取癌癥患者的組織，進(jìn)行全基因測(cè)序，根據(jù)全基因測(cè)序結(jié)果篩選出與該癌癥患者所患癌相關(guān)聯(lián)的錯(cuò)義突變的突變位點(diǎn)，查詢各突變位點(diǎn)的上下游序列，得到突變多肽；

所述突變多肽的長(zhǎng)度為25-35個(gè)氨基酸，突變位點(diǎn)位于其對(duì)應(yīng)的突變多肽的氨基酸序列的1/3到2/3處。