[發(fā)明專(zhuān)利]個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110514605.2
• 申請(qǐng)日: 2021-05-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112972666B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉明錄;張傳鵬;馮建海;強(qiáng)邦明;王立新;韓慶梅;金海鋒;盧永燦;王亮;李希鵬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/00
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/00;A61P35/00;A61P35/04;C12N5/10;C12N15/62;C12N15/864;C07K19/00
• 代理公司: 山東華君知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37300
• 代理人: 武歡歡

1.個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法，其特征在于：所述制備方法，包括篩選腫瘤患者的抗原位點(diǎn)；所述篩選腫瘤患者的抗原位點(diǎn)，包括全基因的突變位點(diǎn)的篩選和腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選；

將全基因的突變位點(diǎn)的篩選得到的突變多肽、腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選得到的腫瘤抗原表位進(jìn)行連接，得到突變肽，在突變肽的N端連接MHC I類(lèi)信號(hào)分子，在C端連接MHCI類(lèi)轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)MITD，MITD通過(guò)T2A與增強(qiáng)型細(xì)胞因子GM-CSF連接，得到重組抗原肽片段；

將全基因的突變位點(diǎn)的篩選得到的突變多肽、腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選得到的腫瘤抗原表位進(jìn)行連接時(shí)，腫瘤抗原表位在前，突變多肽在后進(jìn)行連接；

所述全基因的突變位點(diǎn)的篩選為對(duì)癌癥患者進(jìn)行全基因測(cè)序，根據(jù)全基因測(cè)序結(jié)果篩選出與該癌癥患者所患癌相關(guān)聯(lián)的錯(cuò)義突變的突變位點(diǎn)，查詢各突變位點(diǎn)的上下游序列，得到突變多肽；

所述突變多肽的長(zhǎng)度為25-35個(gè)氨基酸，突變位點(diǎn)位于其對(duì)應(yīng)的突變多肽的氨基酸序列的1/3到2/3處；

所述腫瘤標(biāo)志物基因抗原表位的篩選，對(duì)該癌癥患者自身攜帶的其所患癌的腫瘤標(biāo)志物基因?qū)?yīng)的氨基酸序列，與病人的HLAI、HLAII進(jìn)行匹配，根據(jù)匹配結(jié)果，選擇%Rank值小于0.5且BindLevel為SW的肽段，篩選得到的肽段，如果有氨基酸重合的，將重合的肽段整合成一個(gè)肽段，如有相鄰的兩個(gè)肽段，間隔10個(gè)氨基酸以內(nèi)，則將相鄰的這兩個(gè)肽段和中間間隔的氨基酸一起整合成一個(gè)肽段，得到腫瘤抗原表位。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法，其特征在于：所述腫瘤標(biāo)志物基因?qū)?yīng)的氨基酸序列，與病人的HLAI、HLAII進(jìn)行匹配，使用的軟件為NetMHCpan、SYFPEITHI或免疫表位數(shù)據(jù)庫(kù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法，其特征在于：所述個(gè)性化基因修飾腫瘤DC疫苗的制備方法還包括重組表達(dá)載體的構(gòu)建、腺相關(guān)病毒的包裝、腫瘤DC疫苗制備；

所述重組表達(dá)載體的構(gòu)建，將表達(dá)重組抗原肽片段的目的基因序列與載體連接，得到重組表達(dá)載體；

所述腺相關(guān)病毒的包裝，將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后使細(xì)胞充分裂解，得到腺相關(guān)病毒；

所述腫瘤DC疫苗制備，將腺相關(guān)病毒感染imDC，得到腫瘤DC疫苗。