[發明專利]一種交聯瓊脂糖親和介質及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110509429.3
• 申請日: 2021-05-11
• 公開（公告）號: CN113231049B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: 應漢杰;莊偉;周曉紅;周文鳳;朱晨杰;吳菁嵐;李明;楊朋朋;陳勇;柳東
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: B01J20/285
• 分類號: B01J20/285;B01J20/30;B01D15/08;C12N9/00;C12P19/30
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 仲凌霞;肖明芳

1.一種交聯瓊脂糖親和介質在純化酶或在酶催化產胞苷酸中的應用，其特征在于，所述交聯瓊脂糖親和介質的制備方法包括如下步驟：

(1)將含瓊脂糖的分散相與含乳化劑的連續相于微通道反應裝置中于65-70℃反應，所得反應液于收集液中固化，得到瓊脂糖微球；

所述分散相為瓊脂糖與水按照質量比為1：15-20組成的混合物；所述連續相為乳化劑與環己烷按照體積比為1-2：3-6組成的混合物；所述分散相和連續相的流速分別為8μL/min，50μL/min，或12μL/min，55μL/min；

(2)將步驟(1)所得瓊脂糖微球依次經如下步驟處理后得到交聯瓊脂糖親和介質；

(i)溶脹、活化、多羥基聚合物修飾；

(ii)交聯；

(iii)活化、偶聯亞氨基二乙酸配基；

(iv)螯合鎳離子；

步驟(ii)中，所述交聯為將多羥基聚合物修飾的瓊脂糖微球先進行一次交聯，再進行二次交聯；其中，所述一次交聯為將多羥基聚合物修飾的瓊脂糖微球混合液與丁二醇雙縮水甘油醚、環氧氯丙烷、堿溶液和NaBH₄反應，降溫，過濾，洗滌，即得一次交聯瓊脂糖微球；其中，所述二次交聯為將一次交聯瓊脂糖微球于DMSO中與環氧氯丙烷、堿溶液反應，降溫，過濾，洗滌，得到二次交聯瓊脂糖微球；

其中，所述純化酶為純化腺苷酸環化酶、尿苷-胞苷激酶或乙酸激酶；

其中，所述酶催化產胞苷酸為尿苷-胞苷激酶和乙酸激酶催化產胞苷酸；所述尿苷-胞苷激酶和乙酸激酶的體積比為15:5。

2.根據權利要求1所述應用，其特征在于，交聯瓊脂糖親和介質在純化酶中的應用包括如下步驟：

S1：向含交聯瓊脂糖親和介質的層析柱加入粗酶液，混勻吸附，棄去余液；

S2：向步驟S1處理后的層析柱中加入0.01-0.05M咪唑，混勻除雜，棄去吸雜液；重復；

S3：向步驟S2處理后的層析柱中加入0.2-0.5M咪唑，混勻洗脫，收集純化后的酶液，即得；

步驟S1中，所述粗酶液與交聯瓊脂糖親和介質的用量比為3-10mL：0.1-3g；

步驟S3中，所述洗脫的溫度為2-6℃。

3.根據權利要求1所述應用，其特征在于，交聯瓊脂糖親和介質在酶催化產胞苷酸中的應用包括如下步驟：

(a)將交聯瓊脂糖親和介質、含有6xHis標記酶的粗酶液和緩沖液反應，固液分離，得到固定化的酶；

(b)向步驟(a)所得固定化的酶中加入緩沖液、胞苷和乙酰磷酸，反應，即得胞苷酸；其中，所述胞苷和乙酰磷酸的體積比為1.8：3.2；

步驟(a)中，所述交聯瓊脂糖親和介質與含有6xHis標記酶的粗酶液的用量比為0.1-3g：0.1-2mL。