[發明專利]AvrPiz-t中持有Inago2的solo-LTR毒性候選菌株的篩選方法在審
| 申請號： | 202110509167.0 | 申請日： | 2021-05-11 |
| 公開（公告）號： | CN113278722A | 公開（公告）日： | 2021-08-20 |
| 發明（設計）人： | 李進斌;王群;陸琳;何成興 | 申請（專利權）人： | 云南省農業科學院農業環境資源研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 昆明科眾知識產權代理事務所(普通合伙) 53218 | 代理人： | 方金敏 |
| 地址： | 650020 云南*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | avrpiz 持有 inago2 solo ltr 毒性 候選 菌株 篩選 方法 | ||
1.AvrPiz-t中持有Inago2反轉座子solo-LTR片段毒性菌株的篩選鑒定的引物，其特征在于：所述的引物序列：
Inago2-F1：5‘-TGGAGTTATCCTCGACAC-3’
Inago2-R1：5‘-CCGAATTCCAGCCGAAGATAC-3’。
2.根據權利要求1所述的引物進行AvrPiz-t中持有Inago2反轉座子solo-LTR片段毒性菌株的篩選鑒定的方法，包括以下步驟：
S1：待測樣菌株總DNA提取；
S2:以步驟(1)中得到的樣品DNA為模板，構建專用PCR反應體系，利用權利要求1所述特異性引物進行PCR擴增；
S3:利用瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增產物進行檢測，當PCR產物為800bp時，該稻瘟病菌菌株發生了變異，即稻瘟病菌菌株插入反轉座子的solo-LTR片段；當PCR產物為600bp時，該稻瘟病菌菌株沒有發生變異，即稻瘟病菌菌株沒有插入Inago2反轉座子的solo-LTR片段。
3.根據權利要求2所述的引物進行AvrPiz-t中持有Inago2反轉座子solo-LTR片段毒性菌株的篩選鑒定的方法，其特征在于：所述的PCR反應體系為2×Pfu PCR MasterMix(Tiangen Biotech Co.LTD,Beijing,China)25μl,10μM引物各1μl,稻瘟病菌總DNA 2μL,滅菌的雙蒸水21μL。
4.根據權利要求2所述的引物進行AvrPiz-t中持有Inago2反轉座子solo-LTR片段毒性菌株的篩選鑒定的方法，其特征在于：所述的PCR擴增反應條件如下：95℃3min預變性,然后35個循環包括95℃變性30s,56℃退火30s,72℃延伸30s,最后72℃延伸7min，1％瓊脂糖凝膠電泳100V 50分鐘檢測PCR反應產物。
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