[發明專利]基于多重熒光定量PCR技術的新冠病毒突變序列檢測技術及其應用

在審

• 申請號: 202110508385.2
• 申請日: 2021-05-11
• 公開（公告）號: CN113025760A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 李萬帥;孔祥賓;湯麗麗
• 申請（專利權）人: 常州國藥醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 黃晶晶

1.一種用于檢測新冠病毒核酸S基因突變類型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括以下任一種或幾種引物和探針，其中每組中的引物都包含正向引物和反向引物，每個所述探針的兩端分別標記有熒光報告基團/熒光淬滅基團：

a.用于檢測S基因突變類型：序列位置23403，序列變化AG的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

b.用于檢測S基因突變類型：序列位置23063，序列變化AT的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.5所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；

c.用于檢測S基因突變類型：序列位置22812-22813，序列變化AGGA的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.9所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；

d.用于檢測S基因突變類型：序列位置23012，序列變化GA的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.5所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光報告基團/熒光淬滅基團選自選自FAM、VIC或HEX、ROX、NED、CY3或CY5熒光報告基團BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1、Tamra和Quencher基團且試劑盒中各個所述探針上熒光報告基團互不相同。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括以下組分中的任一種或幾種：PCR反應液、酶混合液、陽性對照、陰性對照。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括緩沖液、MgCl₂、dUTP和dNTPs；所述酶混合液包括Taq酶、反轉錄酶和UNG酶。

5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含有部分新冠病毒的基因序列的假病毒或含有新冠病毒突變序列的假病毒。

6.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為無菌水。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于檢測內參基因的探針。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述探針包括核苷酸序列如SEQ IDNo.4、SEQ ID No.8、SEQ ID No.12、SEQ ID No.14所示的多核苷酸中的任一種或幾種。

9.如權利要求1-8任一項所述試劑盒用于檢測以下任一種或幾種新冠病毒核酸S基因突變類型中的用途：a,S基因突變類型：序列位置23403，序列變化AG；b.S基因突變類型：序列位置23063，序列變化AT；c.S基因突變類型：序列位置22812-22813，序列變化AGGA；d.S基因突變類型：序列位置23012，序列變化GA。

10.如權利要求1-8任一項所述試劑盒在制備檢測以下任一種或幾種新冠病毒核酸S基因突變類型的產品中的用途：a.S基因突變類型：序列位置23403，序列變化AG；b.S基因突變類型：序列位置23063，序列變化AT；c.S基因突變類型：序列位置22812-22813，序列變化AGGA；d.S基因突變類型：序列位置23012，序列變化GA。