[發明專利]廣陳皮貯藏年限的分子鑒定方法有效
| 申請號： | 202110507207.8 | 申請日： | 2021-05-10 |
| 公開（公告）號： | CN113278685B | 公開（公告）日： | 2022-10-14 |
| 發明（設計）人： | 晁志;李放;李嬋 | 申請（專利權）人： | 南方醫科大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京市誠輝律師事務所 11430 | 代理人： | 范盈;李玉娜 |
| 地址： | 510515 廣東省廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 陳皮 貯藏 年限 分子 鑒定 方法 | ||
1.廣陳皮貯藏年限的分子鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)、制備trnL-trnF片段標準品，通過熒光定量PCR方法進行各稀釋濃度標準品的Cq值的測定，建立trnL-trnF DNA片段的拷貝數對數與相應Cq值的標準曲線；
所述trnL-trnF DNA片段的引物序列為：
CTR02-F：CTCTTATCACAAGCCGTATGGTCTATACGATATATGTAGA；
CTR02-R：TATGAGCAATAATATGGATTGGGAATCATTAAAACG；
(2)、提取不同貯藏年限廣陳皮的基因組DNA作為模板，通過熒光定量PCR方法測定DNA模板中trnL-trnF片段的Cq值，將不同貯藏年限樣品得到的Cq值代入到步驟(1)的標準曲線，計算出拷貝數對數值；
(3)、將不同貯藏年限廣陳皮中trnL-trnF片段所得的拷貝數對數值與貯藏年限進行線性回歸分析，建立基于DNA片段拷貝數判斷不同貯藏年限的廣陳皮的相關曲線；
所述不同貯藏年限的廣陳皮的貯藏時間為1、2、3、4、5、8、12年。
2.根據權利要求1所述的廣陳皮貯藏年限的分子鑒定方法，其特征在于，trnL-trnF片段標準品為基于擴增子標準品或基于質粒標準品。
3.根據權利要求1所述的廣陳皮貯藏年限的分子鑒定方法，其特征在于，所述熒光定量PCR反應的擴增體系為：DNA模板2μL；上下游引物各0.6μL；Takara TBGreen Premix Ex TaqⅡ10μL；去離子水6.8μL，反應總體積為20μL。
4.根據權利要求1所述的廣陳皮貯藏年限的分子鑒定方法，其特征在于，qPCR擴增程序為：95℃預變性10min；95℃變性15s，59℃退火1min，共40個循環，在每個循環延伸結束時采集熒光信號。
5.根據權利要求1所述的廣陳皮貯藏年限的分子鑒定方法，其特征在于，貯藏年限1、2、3、4、5、8、12年廣陳皮拷貝數的對數值與貯藏年限進行線性回歸分析是以貯藏年限為橫坐標，lg拷貝數為縱坐標或以lg拷貝數為橫坐標，貯藏年限為縱坐標最終生成相關曲線。
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