[發(fā)明專利]一種用于檢測特納綜合征的引物及探針組合物、非診斷檢測方法及試劑盒

在審

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• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113005196A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于超計;吳文立;王倩玉;趙立明
• 申請（專利權(quán)）人: 北京華瑞康源生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 成都頂峰專利事務(wù)所(普通合伙) 51224
• 代理人: 楊俊華

本發(fā)明屬于生物基因技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于檢測特納綜合征的引物及探針組合物、非診斷檢測方法及試劑盒。該試劑盒是由引物及探針組合物、PCR反應(yīng)液、混合液和對照品組成，在使用時僅需加入樣本DNA并將反應(yīng)液、PCR混合液混合即可，利用X染色體中的AR基因和Y染色體SRY基因雙基因同時進(jìn)行檢測。本發(fā)明能夠同時實現(xiàn)對特納綜合征和是否帶有Y染色體遺傳物質(zhì)的檢測。該試劑盒通過熒光定量PCR的方法檢測，檢測效率和靈敏度高，試劑成本低，具有便捷性，對操作使用人員技能要求低；該試劑盒的使用方法及檢測流程中對選用的檢測設(shè)備要求較低，成本付出較少，便于購置，便于大規(guī)模推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物基因技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測特納綜合征的引物及探針組合物、非診斷檢測方法及試劑盒。

背景技術(shù)

特納綜合征(Turner syndrome,TS)，又稱先天性卵巢發(fā)育不全，是一種女性染色體核型為45，XO的遺傳疾病。即患者性染色體只有一條完整的X染色體，另一條X染色體完全或部分缺失，臨床主要表現(xiàn)為生長落后和性腺發(fā)育不良。特納綜合征是女性最常見的性染色體異常疾病之一，據(jù)統(tǒng)計在女性胎兒中的發(fā)生率為3％，由于有較高的流產(chǎn)率，其中只有1％胎兒可分娩并存活，因先天性卵巢發(fā)育不全而流產(chǎn)的胚胎在自然流產(chǎn)的胚胎中占7％～10％，活產(chǎn)女嬰發(fā)病率為1/2000～1/4000。目前全世界范圍大約有150萬特納綜合征患者，50％患者伴有心血管系統(tǒng)發(fā)育異常。主動脈狹窄是威脅患者生命的最大危險，特納綜合征患者的死亡風(fēng)險比正常婦女高三倍，其壽命縮短約13年。

目前特納綜合癥的檢測方法主要是外周血染色體核型分析。外周血染色體核型分析需要采集受檢者外周血，進(jìn)而對外周血進(jìn)行分離培養(yǎng)，以分裂中期染色體為觀察對象，根據(jù)染色體的長度、著絲點位置、長短臂比例、隨體的有無等特征，并借助顯帶技術(shù)對染色體進(jìn)行分析、比較、排序和編號，根據(jù)染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變異情況來進(jìn)行診斷。本檢測方法所需周期長，對檢測人員的技術(shù)要求、經(jīng)驗都有非常高的要求，對于臨床大范圍的推廣和適用有一定的困擾。10％-15％的特納綜合征患者可能保留有部分的Y染色體遺傳物質(zhì)。其中，以SRY基因最常見。研究發(fā)現(xiàn)，攜帶Y染色體物質(zhì)患者會有男性化表現(xiàn)，這類患者有40％-60％的可能性發(fā)生性腺母細(xì)胞瘤。

目前，臨床中只有通過FISH的方法對特納綜合征(Turner)綜合征患者SRY基因的檢測進(jìn)行有效。但是，由于FISH方法對操作者具有非常高的技術(shù)要求，結(jié)果也需要通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察方可得到；此外，F(xiàn)ISH還依賴于細(xì)胞培養(yǎng)對樣本采集和保存均有較高的要求，不便于臨床的廣泛應(yīng)用。此外，高通量測序也可以檢測SRY基因的存在，但是其操作復(fù)雜、所用儀器價格昂貴，其主要應(yīng)用于同時對多個基因進(jìn)行檢測，不適合單個基因的檢測。

因此，建立一種快速簡便易于推廣的對特納綜合征進(jìn)行分子遺傳學(xué)確認(rèn)以及是否帶有人SRY基因進(jìn)行檢測，對于特納綜合征的輔助診斷及治療方案的選擇具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明目的在于提供一種用于檢測特納綜合征的引物及探針組合物、非診斷檢測方法及試劑盒。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種用于檢測特納綜合征的引物及探針組合物，其特征在于，所述引物及探針組合物包括兩組靶基因特異性引物對及兩組探針、一組內(nèi)參基因特異性引物對及探針；

所述兩組靶基因包括AR基因和SRY基因；所述內(nèi)參基因為CFTR基因；

所述AR基因特異性引物對及探針包括AR基因特異性上游引物核苷酸序列SEQ IDNO.1、AR基因特異性下游引物核苷酸序列SEQ ID NO.2和AR基因探針核苷酸序列SEQ IDNO.3；

所述SRY基因特異性引物對及探針包括SRY基因特異性上游引物核苷酸序列SEQID NO.4、SRY基因特異性下游引物核苷酸序列SEQ ID NO.5和SRY基因探針核苷酸序列SEQID NO.6；