[發明專利]一種靶向敲除HBx蛋白的質粒及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 202110506989.3 | 申請日： | 2021-05-10 |
| 公開（公告）號： | CN113293179A | 公開（公告）日： | 2021-08-24 |
| 發明（設計）人： | 周俊;王臘;孫丹丹;鄧洋;丁士杰 | 申請（專利權）人： | 武漢科技大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/51;A61K48/00;A61P1/16;A61P31/20 |
| 代理公司： | 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247 | 代理人： | 張杰 |
| 地址： | 430000 *** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 靶向 hbx 蛋白 質粒 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種靶向敲除HBx蛋白的質粒，其特征在于，所述質粒為pCMVHBV-HBx(-)，所述質粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如權利要求1所述的一種靶向敲除HBx蛋白的質粒的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：以pCMVHBV質粒為模板，加入HBx的CDS突變型引物進行PCR擴增，擴增產物經凝膠回收，孵育，大腸桿菌轉化，測序驗證得到pCMVHBV-HBx(-)質粒。
3.如權利要求2所述的一種靶向敲除HBx蛋白的質粒的構建方法，其特征在于，所述引物是由HBx的CDS區域編碼第六位蛋白的堿基突變而成。
4.如權利要求2所述的一種靶向敲除HBx蛋白的質粒的構建方法，其特征在于，所述引物包括一個正向引物和一個反向引物，其中：
正向引物序列：5’-CTGTGATGCCAACTGGATCCTGCG-3’；
反向引物序列：5’-GCATCACAGCCTAGCAGCCAT-3’。
5.如權利要求2所述的一種靶向敲除HBx蛋白的質粒的構建方法，其特征在于，所述PCR擴增體系包括：正向引物、反向引物和pCMVHBV，其中正向引物、反向引物和pCMVHBV的體積比為正向引物:反向引物:pCMVHBV＝5:5:4；所述PCR反應程序為：98℃預變性30sec，98℃變性10sec，55℃退火30sec，72℃延伸3min，98℃預變性30sec，72℃徹底延伸3min，變性-退火-延伸程序重復循環25次。
6.如權利要求1所述的一種靶向敲除HBx蛋白的質粒在制備治療乙肝病毒藥物中的應用。
7.如權利要求1所述的一種靶向敲除HBx蛋白的質粒在制備pgRNA和cccDNA抑制劑中的應用。
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