[發明專利]一種檢測miRNA-198的熒光殼聚糖纖維及其制備方法

有效

• 申請號: 202110506189.1
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113235188B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 余躍;馮宵暉
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6825;D01F9/00;C08B37/08;C09K11/06
• 代理公司: 北京科迪生專利代理有限責任公司 11251
• 代理人: 李曉莉

1.一種熒光殼聚糖纖維的制備方法，其特征在于：將熒光染料異硫氰酸熒光素溶解于二甲亞砜中制備混合液，將殼聚糖溶解于三氟乙酸中制備混合液，待各自溶解完全以后，將上述兩種混合液再混合，機械攪拌均勻，通過手工拉絲的方法產出纖維，生產出來的纖維在堿性條件下反應，使異硫氰酸熒光素與殼聚糖充分反應，完成熒光殼聚糖纖維的制備。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述熒光染料異硫氰酸熒光素與所述殼聚糖的質量比為（1：250）~（1：300）。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述熒光染料異硫氰酸熒光素與所述殼聚糖的質量比為1：300。

4.一種非診斷目的的檢測miRNA-198的方法，其特征在于：

步驟一、將單鏈DNA探針probe1修飾到根據權利要求1所述的方法制備的熒光殼聚糖纖維上：將堿性條件下反應超過24小時的熒光殼聚糖纖維加入到乙二醇二縮水甘油醚中，在室溫下反應12-16個小時，然后將反應好的熒光殼聚糖纖維繼續加入5’端帶有氨基的單鏈DNA探針probe1中于32℃-37℃反應6-12小時得到probe1修飾的熒光殼聚糖纖維；

步驟二、將帶有熒光淬滅基團BHQ1的DNA探針probe2修飾到熒光殼聚糖纖維上進行熒光淬滅：所述probe2與所述probe1部分堿基互補配對，通過DNA的鏈雜交反應將接有淬滅基團BHQ1的probe2修飾到熒光殼聚糖纖維上根據熒光共振能量轉移原理進行熒光淬滅；

步驟三、將淬滅后的熒光殼聚糖纖維與CHA反應所需的發夾探針H1,發夾探針H2以及含有目標miRNA-198的樣品混合，檢測熒光淬滅后的熒光殼聚糖纖維端頭光波導熒光亮度的變化；miRNA-198作為催化劑通過toehold催化發夾探針H1、發夾探針H2形成雙鏈結構，形成的雙鏈通過toehold替換下BHQ1-ssDNA2，使微米管端頭光波導熒光恢復；

步驟四、將單堿基突變，三堿基突變，以及其他種類的microRNA放置于CHA鏈置換反應中，來反映探針組對miRNA-198的特異性；所述其他種類的microRNA包括miRNA-21和miRNA-34A；所述探針組包括發夾探針H1和發夾探針H2，所述發夾探針H1的序列如SEQ ID NO：3所示；所述發夾探針H2的序列如SEQ ID NO：4所示，發夾探針H1和發夾探針H2會形成發夾結構，在目標miRNA-198的存在下會催化兩個發夾探針裝配成雙鏈，形成雙鏈的探針會將雜交成雙鏈的probe1和probe2分開。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述probe2的序列如SEQ ID NO：1所示；所述probe1的序列如SEQ ID NO：2所示。