[發明專利]一種抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片及其制備方法與在選擇性分離單個循環腫瘤細胞中的應用

在審

• 申請號: 202110506141.0
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113340859A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 劉威;陳貝
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12M1/00;C12N5/09
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 常海濤

1.一種抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片的制備方法，其特征在于，所述方法包括：

將明膠納米顆粒采用MES溶液清洗，后于EDC/NHS溶液中浸泡，獲得NHS功能化明膠納米顆粒；

將玻片于APTES無水乙醇中浸泡，后用乙醇溶液洗滌，獲得胺化處理玻片；

將所述NHS功能化明膠納米顆粒置于所述胺化處理玻片上反應，獲得明膠納米顆粒修飾的玻璃基板；

將所述明膠納米顆粒修飾的玻璃基板的表面修飾抗Epcam抗體，獲得抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片。

2.根據權利要求1所述的一種抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片的制備方法，其特征在于，所述EDC/NHS溶液為將(3.5～4.5)mg/mL EDC和(5.5～6.5)mg/mL NHS溶解在(0.05～0.15)M的MES溶液中配制而得。

3.根據權利要求1所述的一種抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片的制備方法，其特征在于，所述APTES無水乙醇中APTES的質量分數為4～6％；所述乙醇溶液的質量分數為70～90％。

4.根據權利要求1所述的一種抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片的制備方法，其特征在于，所述將所述明膠納米顆粒修飾的玻璃基板的表面修飾抗Epcam抗體，獲得抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片，包括：

將所述明膠納米顆粒修飾的玻璃基板于鏈酶親和素中浸泡，后PBS洗滌，再與生物素化抗Epcam抗體室溫孵育，獲得抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片。

5.一種采用權利要求1-4任一所述方法獲得的一種抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片。

6.一種權利要求5所述的抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片在選擇性分離單個循環腫瘤細胞中的應用。

7.一種選擇性分離單個循環腫瘤細胞的方法，其特征在于，所述方法采用權利要求5所述的抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片，包括：

將細胞懸液加入到所述抗體-明膠納米顆粒修飾的芯片上進行孵育，獲得捕獲多個循環腫瘤細胞的芯片；

將含有LAP的CSMA溶液滴加到所述捕獲了多個循環腫瘤細胞的芯片上，后采用405nm的激光照射，獲得含有光固化水凝膠包封的單個循環腫瘤細胞的芯片；

采用MMP-9酶溶液溶解基底以去除其他細胞，后通過微操作取出并獲得所述光固化水凝膠包封的單個循環腫瘤細胞。

8.根據權利要求7所述的選擇性分離單個循環腫瘤細胞的方法，其特征在于，所述孵育時間為15～120min。

9.根據權利要求1所述的選擇性分離單個循環腫瘤細胞的方法，其特征在于，所述含有LAP的CSMA溶液中CSMA的質量分數為4.5～5.5％，所述LAP的質量分數為0.1～0.9％。

10.根據權利要求1所述的選擇性分離單個循環腫瘤細胞的方法，其特征在于，所述MMP-9酶溶液的濃度為0.05～0.5mg/mL。