[發(fā)明專利]一種利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110502103.8 | 申請日： | 2021-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN113106088A | 公開（公告）日： | 2021-07-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王磊;黃夢璐;喬志剛;于淼;江紅霞;張猛 | 申請（專利權(quán)）人： | 河南師范大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 新鄉(xiāng)市平原智匯知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41139 | 代理人： | 路寬 |
| 地址： | 453007 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 氯仿 快速 提取 黃河 基因組 dna 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種利用酚?氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法，其具體過程為：采用渦旋震蕩10s的混合方式將樣品與混合試劑混合均勻，其中混合試劑為體積比25:24:1的苯酚、氯仿與異戊醇的混合溶液，再利用低溫冷凍離心機(jī)在12000rpm、4℃的條件下離心2min，最終提取得到黃河鯉基因組DNA。本發(fā)明改進(jìn)了傳統(tǒng)酚?氯仿提取方法，大大縮短了實驗用時，提高了實驗效率。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于黃河鯉基因組DNA提取方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法。
背景技術(shù)
黃河鯉（
血液是提取基因組DNA常用的材料，但抽血過多會對實驗用魚的存活及生長造成很大影響，且操作較為復(fù)雜，該方法不太適用于大量制備樣品。梁利群等認(rèn)為由于魚類鰭條中上皮細(xì)胞、骨細(xì)胞等組織的存在，所含基因組DNA足夠保證檢測外源基因的需要。剪取魚類鰭條與抽血、取肝臟或肌肉組織的方法相比操作更為簡便，同時可以避免損傷和殺害樣本。
酚-氯仿法是提取基因組DNA最經(jīng)典的方法之一，該方法成本較低，提取效率相對較高，但操作步驟復(fù)雜，所用試劑較多且用時較長。劉臻等運用試劑盒法和酚-氯仿法提取鯽魚基因組 DNA ，并對兩種方法的實驗結(jié)果進(jìn)行了對比。馬洪雨等用改進(jìn)后的酚-氯仿法所提取的三種魚類肌肉組織基因組DNA的質(zhì)量顯著高于傳統(tǒng)酚-氯仿法。范慧慧等通過改進(jìn)后的酚-氯仿法同樣能夠獲得高質(zhì)量的香魚肌肉組織基因組DNA。綜上，改進(jìn)酚-氯仿法的部分步驟從而提高魚類基因組DNA質(zhì)量的研究已有很多，但專門針對縮短主要提取步驟的時間來提高實驗效率的研究報道在魚類基因組DNA領(lǐng)域還未看到，而在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域較為常見。在常規(guī)凝血實驗中，Lippi Giuseppe等人為減少制備血液標(biāo)本的樣品處理時間，設(shè)計實驗建立了一個最小合適的離心時間。根據(jù)他們的實驗，在1500xg 5-10min離心時間最適合于收集常規(guī)凝血試驗的初級管。Denis Monneret等人和Richard Prusa為提高醫(yī)院實驗室周轉(zhuǎn)效率，分別就離心時間、收集時間等作了研究比較。崔明等探討了縮短離心時間對臨床常用心肌損傷標(biāo)志物檢測結(jié)果的影響，結(jié)果表明縮短離心時間不影響檢測結(jié)果，同時可以縮短標(biāo)本周轉(zhuǎn)時間。本實驗擬對傳統(tǒng)酚-氯仿法部分步驟進(jìn)行改進(jìn)，以期在不影響實驗效果的前提下盡量提高實驗效率。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法，該方法優(yōu)化了利用酚-氯仿法提取鯉基因組DNA的時間條件，提高了實驗效率，為鯉DNA分子生物學(xué)研究提供了基礎(chǔ)和前提。
本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法，其特征在于具體過程為：采用渦旋震蕩10s的混合方式將樣品與混合試劑混合均勻，其中混合試劑為體積比25:24:1的苯酚、氯仿與異戊醇的混合溶液，再利用低溫冷凍離心機(jī)在12000rpm、4℃的條件下離心2min，最終提取得到黃河鯉基因組DNA。
本發(fā)明所述的利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法，其特征在于具體步驟為：
步驟S1：用滅菌后的剪刀剪取黃河鯉新鮮鰭條組織，剪碎后置于滅菌的EP管內(nèi)備用；
步驟S2：在EP管內(nèi)加入組織提取液和蛋白酶K，其中組織提取液的成分為：Tris-Cl10mmol/L、EDTA 100mmol/L、NaCl 100mmol/L和SDS 0.5wt%，蓋上瓶蓋后顛倒混勻，再放入干式恒溫器中設(shè)置溫度為55℃消化過夜，直至消化澄清；
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