[發明專利]一種利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 202110502103.8
• 申請日: 2021-05-08
• 公開（公告）號: CN113106088A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 王磊;黃夢璐;喬志剛;于淼;江紅霞;張猛
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 41139
• 代理人: 路寬

1.一種利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法，其特征在于具體過程為：采用渦旋震蕩10s的混合方式將樣品與混合試劑混合均勻，其中混合試劑為體積比25:24:1的苯酚、氯仿與異戊醇的混合溶液，再利用低溫冷凍離心機在12000rpm、4℃的條件下離心2min，最終提取得到黃河鯉基因組DNA。

2.根據權利要求1所述的利用酚-氯仿法快速提取黃河鯉基因組DNA的方法，其特征在于具體步驟為：

步驟S1：用滅菌后的剪刀剪取黃河鯉新鮮鰭條組織，剪碎后置于滅菌的EP管內備用；

步驟S2：在EP管內加入組織提取液和蛋白酶K，其中組織提取液的成分為：Tris-Cl10mmol/L、EDTA 100mmol/L、NaCl 100mmol/L和SDS 0.5wt%，蓋上瓶蓋后顛倒混勻，再放入干式恒溫器中設置溫度為55℃消化過夜，直至消化澄清；

步驟S3：取出EP管將樣品冷卻至室溫，加入混合試劑，再將EP管置于渦旋震蕩器上以1500r/min的轉速震蕩10s充分混合均勻，然后利用低溫冷凍離心機在12000rpm、4℃的條件下離心2min；

步驟S4：在EP管中加入兩倍于上清液體積的提前預冷的無水乙醇，上下顛倒使得乙醇和上清液完全混合均勻，然后利用低溫冷凍離心機在12000rpm、4℃的條件下離心5min；

步驟S5：棄掉上清液后加入提前預冷的體積分數為70%的乙醇進行洗滌，再利用低溫冷凍離心機在12000rpm、4℃的條件下離心2min將乙醇棄掉或者用移液管將乙醇吸出；

步驟S6：開蓋待乙醇完全揮發后加入滅菌的超純水溶解過夜，并于-20℃保存備用。