[發(fā)明專利]一種HPLC-MS/MS聯(lián)用同時檢測人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110498547.9
• 申請日: 2021-05-08
• 公開（公告）號: CN113358768B
• 公開（公告）日: 2022-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫茜;高倩倩;李艷靜
• 申請（專利權(quán)）人: 南京一諾醫(yī)藥科技有限公司;南京海納醫(yī)藥科技股份有限公司;南京海納制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 南京思拓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤;王海云

本發(fā)明涉及一種HPLC?MS/MS聯(lián)用同時檢測人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的方法，它包括以下步驟：(1)人血漿樣品前處理；(2)液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用檢測；(3)人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的測定。采用本發(fā)明的檢測方法，在血漿樣品預(yù)處理時以埃索美拉唑作為內(nèi)標(biāo)，采用IC作為色譜柱進(jìn)行梯度洗脫，可以直接分離左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑，樣品配制簡單，分析時間短，對檢測設(shè)備要求低，具有檢測所需血漿量少，重現(xiàn)性好、靈敏度高、分析速度快、基質(zhì)效應(yīng)影響小等優(yōu)點，可用于評價將有利于藥物的安全使用和注射用右蘭索拉唑的一致性評價。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物分析領(lǐng)域，具體涉及一種HPLC-MS/MS聯(lián)用同時檢測人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的方法。

背景技術(shù)

蘭索拉唑為質(zhì)子泵抑制劑。質(zhì)子泵抑制劑為苯并咪唑類衍生物，特異性和非競爭性的作用于H+/K+-ATP酶，治療消化性潰瘍。質(zhì)子泵抑制劑多為脂溶性弱堿性，吸收入血后進(jìn)入壁細(xì)胞分泌小管、小管泡腔中酸性環(huán)境后，活化產(chǎn)物一般為活性次磺酸和次磺酰胺，與H+-K+-ATP酶巰基偶聯(lián)形成一個不可逆的共價二硫鍵，阻斷H+-K+轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，從而抑制胃酸分泌，主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、反流性食管炎、胃泌素瘤等消化性疾病的治療，蘭索拉唑不對稱亞硫酰基中有一個手性中心，因此，有兩個對映體：R-和S-蘭索拉唑，R-蘭索拉唑稱為右旋蘭索拉唑，與相同劑量的S-蘭索拉唑相比較，右旋蘭索拉唑表現(xiàn)出更高的體內(nèi)藥理學(xué)反應(yīng)，因為，S-蘭索拉唑體內(nèi)清除比右旋蘭索拉唑迅速。口服蘭索拉唑后，右旋蘭索拉唑是主要的循環(huán)對映體，約占血漿濃度-時間曲線下面積(AUC)的85％。因為，口服右旋蘭索拉唑后，血漿中未檢測到S-蘭索拉唑，所以人體內(nèi)不會出現(xiàn)右旋蘭索拉唑消旋轉(zhuǎn)化為S-蘭索拉唑。國外的體內(nèi)藥效學(xué)試驗結(jié)果也表明，蘭索拉唑的藥理作用主要來自于它的R-(+)-對映異構(gòu)體，即右旋蘭索拉唑。

中國專利CN 111337615A公開液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時檢測人血漿中奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑和泮托拉唑?qū)τ丑w的濃度，在該專利中披露采用等度洗脫同時測定人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑濃度，分析時間為10min，分析時間較長，對檢測設(shè)備的要求高，不適用于大批量生物樣本的檢測要求；在配制工作液時，采用的溶劑為含0.1％氨水的乙腈，由于氨水有刺激性的氣味也易揮發(fā)，在檢測的過程中給實驗操作人員帶來了危害，也干擾測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

鑒于上述的缺陷，需開發(fā)更簡單、可靠的樣品預(yù)處理方法以及血漿藥物濃度檢測的方法，用于人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的同時測定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，提供一種HPLC-MS/MS聯(lián)用同時檢測人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的方法，具有前處理所需血漿量少、操作簡單、重現(xiàn)性好、靈敏度高、分析速度快、基質(zhì)效應(yīng)影響小，提取回收率高等優(yōu)點。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種HPLC-MS/MS聯(lián)用同時檢測人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的方法，它包括以下步驟：(1)人血漿樣品前處理；(2)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，采用流動相A和流動相B為混合流動相進(jìn)行梯度洗脫，其中，流動相A為乙腈-水；流動相B為包含0.01～0.1％乙酸的3～7mM乙酸銨水溶液-乙腈；(3)人血漿中左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑的測定；梯度洗脫過程如下：在0-0.5分鐘內(nèi)，流動相A和流動相B的體積比為55:45；在0.5-4.5分鐘內(nèi)，流動相A和流動相B的體積比由55:45勻速漸變至60:40；在4.5-4.6分鐘內(nèi)，流動相A和流動相B的體積比由60:40勻速漸變至90:10；在4.6-5.0分鐘內(nèi)，流動相A和流動相B的體積比為90:10；在5.0-5.1分鐘內(nèi)，流動相A和流動相B的體積比由90:10勻速漸變至55:45；在5.1-6.5分鐘內(nèi)，流動相A和流動相B的體積比為45:55；具體的梯度洗脫過程如表1：

表1左旋蘭索拉唑和右旋蘭索拉唑液相色譜梯度