[發明專利]一種巨噬細胞外泌體膜包被仿生納米顆粒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110493229.3
• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN113197880B
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 呂坤;裴緯亞;張鶯鶯
• 申請（專利權）人: 皖南醫學院第一附屬醫院（皖南醫學院弋磯山醫院）
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K47/34;A61K47/59;A61K47/69;A61K31/7088;A61P11/06;A61P37/08
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 趙麗

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種巨噬細胞外泌體膜包被仿生納米顆粒及其制備方法和應用，其由外泌體膜包被納米顆粒形成；所述的外泌體膜從骨髓來源的M2巨噬細胞分離得到；所述的納米顆粒由聚乳酸?乙醇酸共聚物PLGA和Dnmt3aos^{smart silencer}共乳化形成。本發明使用EM?PLGA@Dnmt3aos^{smart silencer}抑制過敏性哮喘中M2巨噬細胞極化非常顯著，該仿生藥有效地積累在肺部并促進基因沉默，同時減少炎性細胞對氣道的浸潤程度。基于M2巨噬細胞外泌體膜的PLGA NP有助于將治療性Dnmt3aos^{smart silencer}遞送至氣道，指導其在AA小鼠模型中更有效的治療。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種巨噬細胞外泌體膜包被仿生納米顆粒及其制備方法和應用。

背景技術

全世界有3億人患有哮喘，估計到2025年將影響4億，過敏性哮喘(AA)占兒童哮喘病例的90％，占成人哮喘病例的50％。巨噬細胞是肺中最豐富的免疫細胞(約占所有免疫細胞的70％)，它們在環境變應原引起的氣道炎癥中起著重要的作用。過繼轉移M2巨噬細胞可加重小鼠過敏性氣道炎癥，表明M2巨噬細胞的極化在AA發作過程中起重要作用。因此，開發針對M2巨噬細胞的新策略被認為是治療AA的一種有前途的方法。

在我們先前的研究中，成千上萬個lncRNA在M1/M2極化的骨髓源性巨噬細胞(BMDM)中差異表達。其中，Dnmt3aos(DNA甲基轉移酶3A，相反鏈)是一種已知的lncRNA，位于Dnmt3a的反義鏈上。并且我們已經證明Dnmt3aos在M2巨噬細胞中高表達并且參與調節Dnmt3a的表達。Dnmt3aos和Dnmt3a的表達是協調一致的，在巨噬細胞極化中起關鍵作用。因此，M2巨噬細胞中的Dnmt3aos可能是AA的良好治療靶標，但其在過敏性哮喘中的作用尚不清楚。

由3個小干擾RNA(siRNA)和3個反義寡核苷酸(ASO)組成的smart silencer在介導靶基因特異性沉默中起著重要作用。由于其不穩定性，有限的細胞攝取和不充分的血液循環，游離的ASO/siRNA在臨床治療中幾乎不可能應用。為了克服ASO/siRNA傳遞的障礙，更高效并且更安全的傳遞載體對于ASO或siRNA治療劑的研究和生產至關重要，例如脂質基顆粒和納米顆粒(NP)。由于其良好的生物降解性和生物相容性，歐洲藥品管理局(EMA)和美國食品藥物管理局(FDA)已批準將聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)用于藥物和生物分子的輸送，可生物吸收的縫合線，生物成像和光療和組織再生。特別是，載有siRNA的PLGA NPs表現出持續釋放的特性，如先前報道的那樣，在第一天釋放35％，并顯示超過10天的持續釋放。因此，PLGA包裹Dnmt3aos的smart silencer對靶細胞的持續調控是值得研究的。

由于納米載體的迅速發展，新的藥物/基因遞送載體也正在出現，例如細胞來源的外泌體，尤其是外泌體的膜，它們表現出優異的靶向性。從親代細胞自然遺傳的器官嗜性賦予外泌體以一系列表面粘附蛋白和特定的載體配體，以實現精確的貨物穿梭。作為一種天然載體，外泌體可以將外源性miRNA或siRNA體內遞送至靶細胞或組織，以調節基因表達并抑制疾病進展。然而，常規轉染基因，外泌體中基因的表達較少，并且最近的研究還證明，當電穿孔誘導siRNA進入外泌體時，siRNA易于降解，表明需要建立更可靠的方案。研究表明某些NP可以與siRNA或ASO形成復合物，這種納米復合物的形成對于完全保護RNA，防止其降解并使它們能夠通過胞吞作用和細胞內釋放進行細胞傳遞非常重要。因此，為了進一步改善NP的生物分布，穩定性，功效和生物相容性，我們迫切需要建立基于外泌體修飾的PLGA系統，以形成結合了這兩種系統優點的復合物。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明提供一種巨噬細胞外泌體膜包被仿生納米顆粒及其制備方法和應用，該仿生藥有效地積累在肺部并促進了基因沉默，同時減少了炎性細胞對氣道的浸潤程度。