[發(fā)明專利]CYP4F22基因突變體、多肽、試劑盒、構建體及重組細胞

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110490021.6
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN114032219A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設計）人: 豐岱榮;趙麗娜;張亞寧
• 申請（專利權）人: 濰坊醫(yī)學院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12Q1/6883;C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 青島鼎尖知識產權代理有限公司 37318
• 代理人: 徐敏杰

1.一種CYP4F22基因突變體，其特征在于，所述編碼CYP4F22突變體的核酸是第8號外顯子的844位核苷酸，存在C→T突變，序列為SEQ ID NO：3；或第11號外顯子的1189位核苷酸，存在C→T突變，序列為SEQ ID NO：5。

2.一種應用如權利要求1所述的CYP4F22基因突變體的多肽，其特征在于，所述多肽具有p.R282W，序列為SEQ ID NO：4；或p.R397C突變，序列為SEQ ID NO：6。

3.一種應用如權利要求1所述的CYP4F22基因突變體的用于篩選易患先天性魚鱗病的生物樣品的試劑盒，其特征在于，所述用于篩選易患先天性魚鱗病的生物樣品的試劑盒含有特異檢測CYP4F22基因突變體p.R282W或p.R397C的試劑。

4.如權利要求3所述的用于篩選易患先天性魚鱗病的生物樣品的試劑盒，其特征在于，所述試劑為核酸引物，所述核酸引物包括：

CYP4F22基因c.844C→T突變所在外顯子8的擴增引物：正向SEQ ID NO：7；反向SEQ IDNO：8；

CYP4F22基因c.1189C→T突變所在外顯子11的擴增引物：正向SEQ ID NO：9；反向SEQID NO：10。

5.一種應用如權利要求1所述的CYP4F22基因突變體的核酸構建體，其特征在于，所述核酸構建體含有CYP4F22基因p.R282W或p.R397C突變體。

6.一種如權利要求5所述核酸構建體的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括：

設計針對野生型CYP4F22 cDNA的全長的上下游擴增引物，上游引物帶Kpn I酶切位點，下游引物帶BamH I酶切位點，PCR方法擴增CYP4F22開放讀碼框序列并進行Kpn I和BamH雙酶切與純化；商業(yè)化的GFP表達載體(pAcGFP1-C1 vector)經Kpn I和BamH I雙酶切并純化后，與酶切純化的CYP4F22開放讀碼框片段，經T4連接酶連接成環(huán)狀雙鏈DNA后，轉化DH5α感受態(tài)細胞，接種于卡那霉素抗性的瓊脂糖平板中過夜培養(yǎng)，挑取單克隆進行Sanger測序，鑒定pAcGFP1-C1-CYP4F22-WT的序列。利用構建好的pAcGFP1-C1-CYP4F22-WT野生型表達載體，通過定點突變法，分別構建p.R282W或p.R397C突變體；p.R282W突變體構建所用定點突變引物序列：正向SEQ ID NO：11，反向SEQ ID NO：12；p.R397C突變體構建所用定點突變引物序列：正向SEQ ID NO：13，反向SEQ ID NO：14。

7.一種應用如權利要求5所述的核酸構建體轉染獲得的重組細胞，所述重組細胞由所述的含有CYP4F22基因p.R282W或p.R397C突變體的核酸構建體轉染受體細胞獲得。

8.一種如權利要求7所述的重組細胞在篩選制備治療先天性魚鱗病的藥物中的應用。