[發明專利]CYP4F22基因突變體、多肽、試劑盒、構建體及重組細胞

在審

• 申請號: 202110490021.6
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN114032219A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 豐岱榮;趙麗娜;張亞寧
• 申請（專利權）人: 濰坊醫學院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12Q1/6883;C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 青島鼎尖知識產權代理有限公司 37318
• 代理人: 徐敏杰

本發明屬于生物基因工程技術領域，公開了一種CYP4F22基因突變體、多肽、試劑盒、構建體及重組細胞，所述編碼CYP4F22突變體的核酸是第8號外顯子的844位核苷酸，存在C→T突變，或第11號外顯子的1189位核苷酸，存在C→T突變；所述多肽具有p.R282W或p.R397C突變；所述試劑盒含有特異檢測CYP4F22基因突變體p.R282W或p.R397C的試劑；所述核酸構建體含有CYP4F22基因p.R282W或p.R397C突變體；所述重組細胞由所述核酸構建體轉染受體細胞獲得。本發明可以用于先天性魚鱗病的輔助診斷，用于發現先天性魚鱗病潛在攜帶者，為該病的產前基因診斷提供依據。

技術領域

本發明屬于生物基因工程技術領域，尤其涉及一種CYP4F22基因突變體、多肽、試劑盒、構建體及重組細胞。

背景技術

目前，先天性魚鱗病是一組罕見的皮膚角化異常疾病，主要表現為全身表皮脫屑異常，并伴有一系列癥狀，如新生兒火棉膠膜、瞼外翻、子癇、頭皮和眉毛瘢痕性脫發、掌跖角化過度、多汗和可變紅斑。先天性魚鱗病包括臨床表現和嚴重程度不同的幾個主要亞型，包括丑角型魚鱗病、板層型魚鱗病和先天性魚鱗病樣紅皮病。

CYP4F22作為導致先天性魚鱗病的致病基因之一，其致病突變較為罕見，到目前為止，國內外共發現50個致病突變，其中超過70％的致病突變是點突變導致的錯義突變和無義突變。

通過上述分析，現有技術存在的問題及缺陷為：CYP4F22基因新發變異缺乏蛋白水平的功能數據，影響新發變異的致病性評級，阻礙了該病臨床診斷的確立和相關家庭的再生育產前基因診斷的進行。目前國際上還沒有關于 CYP4F22基因相關突變位點導致先天性魚鱗病的報道。

解決以上問題及缺陷的難度為：目前沒有直接可利用的帶有特定突變的 CYP4F22基因的構建體用于體外功能研究；缺乏帶有特定突變的CYP4F22多肽；沒有帶有特定突變構建體的重組細胞，這幾個問題均阻礙了CYP4F22基因新發變異的致病性評級。

解決以上問題及缺陷的意義為：以上問題的解決可以明確魚鱗病表型相關的CYP4F22基因中新發變異的致病性，為明確患者的分子遺傳學診斷、指導患者的精準治療及其避免該家系的再生育風險有重要意義。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種CYP4F22基因突變體、多肽、試劑盒、構建體及重組細胞。

本發明是這樣實現的，一種CYP4F22基因突變體，所述編碼CYP4F22突變體的核酸是第8號外顯子的844位核苷酸，存在C→T突變，序列為SEQ ID NO：3；或第11號外顯子的1189位核苷酸，存在C→T突變；序列為SEQ ID NO：5。

本發明的另一目的在于提供一種應用所述的CYP4F22基因突變體的多肽，所述多肽具有p.R282W，氨基酸序列為SEQ ID NO：4；或p.R397C突變，氨基酸序列為SEQ ID NO：6。

本發明的另一目的在于提供一種應用所述的CYP4F22基因突變體的用于篩選易患先天性魚鱗病的生物樣品的試劑盒，所述用于篩選易患先天性魚鱗病的生物樣品的試劑盒含有特異檢測CYP4F22基因突變體p.R282W或p.R397C的試劑。

進一步，所述試劑為核酸引物：

CYP4F22基因c.844C→T突變所在外顯子8的擴增引物：正向 5'-ggctcagacctgtaacccag-3'(SEQ ID NO：7)，反向5'-gagccaccacgcctaatg-3'(SEQ ID NO：8)；

CYP4F22基因c.1189C→T突變所在外顯子11的擴增引物：正向 5'-ggtggctcggcctctag-3'(SEQ ID NO：9)，反向5'-tctccctgcacacacaactg-3'(SEQ ID NO：10)。