[發(fā)明專利]一種用于細(xì)辛屬植物材料快速鑒定的PCR引物、試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110489539.8
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113186331A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石俊霞;王超楠;姜帆;朱水芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京百歐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11930
• 代理人: 鄒曉艷

本發(fā)明公開了一種用于細(xì)辛屬植物快速鑒定的PCR引物和試劑盒及其應(yīng)用，所述引物的核苷酸序列為：Asa_F：5'?TATCTCTTTCTTTTTTTCAAAAGG?3'，Asa_R：5'?ATGGGCTTTTGCCAATGAGCCAATC?3'。還公開了一種細(xì)辛屬植物快速鑒定的方法和試劑盒，特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于細(xì)辛屬植物快速鑒定的PCR引物、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

馬兜鈴科(Aristolochiaceae)隸屬于被子植物門雙子葉植物綱木蘭亞綱馬兜鈴目(Aristolochiales)，分為馬兜鈴亞科和細(xì)辛亞科，包含植物600余種，且大多含有馬兜鈴酸。主要藥材包括馬兜鈴、關(guān)木通、廣防己、細(xì)辛、青木香、天仙藤、朱砂蓮、馬蹄香等。馬兜鈴屬植物中主要含有馬兜鈴?fù)⑶嗄鞠闼帷⒓句@生物堿、木蘭堿、輪環(huán)藤堿等成分。細(xì)辛屬(學(xué)名：Asarum L.)植物多數(shù)種類主要成分為甲基丁香酚、黃樟醚、細(xì)辛酮、沈香酸、大屯細(xì)辛酮以及有強(qiáng)心作用的生物堿。

馬兜鈴科植物在傳統(tǒng)方劑、藥膳中應(yīng)用很廣，但隨著對馬兜鈴酸毒性認(rèn)識(shí)的不斷深入，馬兜鈴酸早在2002年就被世界衛(wèi)生組織(WHO)列入第一類致癌物。我國藥品監(jiān)督管理部門對中草藥物的限制也在不斷加強(qiáng)，2008年，國家食品藥品監(jiān)督管理局(現(xiàn)國家食品藥品監(jiān)督管理總局)制定《含毒性藥材及其他安全性問題中藥品種的處理原則》，要求加強(qiáng)對相關(guān)藥物的研究和管理；在2017年中國國家藥監(jiān)總局還公布《可能含有馬兜鈴酸的馬兜鈴科藥材名單》，因此，馬兜鈴科中的馬兜鈴亞科植物基本在食品/保健品中已經(jīng)禁用，但是細(xì)辛屬植物仍然在用，其含有馬兜鈴酸。基于以下原因，有必要開發(fā)針對細(xì)辛屬植物的快速鑒定技術(shù)：(1)細(xì)辛屬植物入藥部位根與白薇、徐長卿等藥材容易混淆難以分辨，中草藥藥品混淆、摻假販賣現(xiàn)象頻發(fā)，難以通過常規(guī)形態(tài)學(xué)方法鑒定；(2)細(xì)辛屬植物作為的中草藥入藥的部位不同，市面上產(chǎn)品無法整體整株展現(xiàn)，無法通過形態(tài)學(xué)鑒定；(3)隨著人們在飲食保健上投入增多，特別是在傳統(tǒng)中藥食療上追求的菜品花樣也日新月異，同時(shí)，純天然無公害的野菜更是受到大眾的追捧，因食用含馬兜鈴酸的藥膳、中草藥劑藥丸而導(dǎo)致馬兜鈴酸中毒的事件頻頻發(fā)生，但由于缺乏有效的快速鑒定技術(shù)，經(jīng)常無法及時(shí)診斷出中毒原因、甚至出現(xiàn)誤診。

綜上，食品安全關(guān)系國計(jì)民生，食品材料的物種鑒定技術(shù)是食品安全鏈的重要環(huán)節(jié)，原料來源不明或成分組成不明的食物會(huì)對食品安全帶來巨大的風(fēng)險(xiǎn)與隱患，常規(guī)的形態(tài)學(xué)鑒定方法解決不了這些問題，因此開發(fā)準(zhǔn)確、快速的鑒定食品中的細(xì)辛成分的技術(shù)十分必要。近十年來，多種分子生物學(xué)技術(shù)已應(yīng)用于其它物種的快速鑒定，例如：DNA條形碼技術(shù)(DNA Barcoding)、PCR技術(shù)、限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)(Restriction FragmentLength Polymorphism，RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)(Random Amplified PolymorphicDNA，RAPD)、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性技術(shù)(Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)以及基因芯片技術(shù)等，但從目前已有報(bào)道來看，還未建立針對細(xì)辛屬植物物種的快速鑒定方法，未能完全滿足我國市場監(jiān)管，食品安全監(jiān)管的檢測檢驗(yàn)需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對上述問題，提供一種用于細(xì)辛屬植物快速鑒定的PCR引物、試劑盒及其應(yīng)用，其特異性強(qiáng)、靈敏度高，能夠快速鑒定出待測植物是否是細(xì)辛屬植物。

本發(fā)明請求保護(hù)的技術(shù)方案如下：

一種用于細(xì)辛屬植物快速鑒定的PCR引物，所述引物的核苷酸序列為：

上游引物Asa_F：5'-TATCTCTTTCTTTTTTTCAAAAGG-3'，

下游引物Asa_R：5'-ATGGGCTTTTGCCAATGAGCCAATC-3'。

一種用于細(xì)辛屬植物快速鑒定的試劑盒，包括前述的PCR引物。