[發(fā)明專利]一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應的分析方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110489452.0
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113189237A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設計）人: 董銳
• 申請（專利權）人: 重慶黃嘉同怡科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 重慶上義眾和專利代理事務所(普通合伙) 50225
• 代理人: 譚勇

本發(fā)明公開了一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應的分析方法：收集不同來源血清樣本；配制標準溶液；制備混合樣本；三種溶液平行進行前處理；將三種溶液注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進行分析；計算血清與標準溶液相對基質(zhì)效應；20％≤ME％≤20％，基質(zhì)效應可忽略；ME％＞20％，基質(zhì)效應抑制嚴重；ME％＜?20％，基質(zhì)效應增強嚴重。本申請方法可以對所有不用來源人血清進行基質(zhì)效應評價，完美解決了同一患者血清量少的難題；解決因無空白基質(zhì)無法采用柱后輸入法進行基質(zhì)效應評價的問題；摒棄傳統(tǒng)基質(zhì)提取后添加法需扣除血清基質(zhì)本身信號值的分析步驟；簡化過程，通過同位素稀釋定量彌補了基質(zhì)效應，內(nèi)標法提高了準確度和精密度，因此具有良好的實際應用之價值。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術領域，具體的說，涉及一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應的分析方法。

背景技術

國際純粹與應用化學聯(lián)合會(IUPAC)將基質(zhì)效應定義為：樣品中除分析物以外的其他成分對待測物測定值的綜合影響，在所有定量和定性分析方法中，基質(zhì)效應是導致方法不準確的主要因素，也是項目開發(fā)驗證中必須考察的重要因素之一，為了減少基質(zhì)效應，報道多采用改進樣品的前處理方法，凈化樣品、優(yōu)化色譜條件，使分析物與內(nèi)源性干擾物質(zhì)色譜分離、改善質(zhì)譜條件，選用不同的離子源、使用靈敏度更好的儀器，減少進樣量等，為了補償基質(zhì)效應，文獻多采用配制基質(zhì)匹配的校正曲線進行定量，或是通過同位素內(nèi)標校正基質(zhì)效應對分析物離子化的影響。目前評價基質(zhì)效應的方法主要有基質(zhì)提取后加入法和柱后灌注法。

其中，基質(zhì)提取后加入法是空白基質(zhì)樣本經(jīng)前處理后添加待測分析物(標準品)與相同濃度標準品的信號響應的差異，它影響分析方法的準確度，能夠得出基質(zhì)抑制或基質(zhì)增強的絕對比例，無法評估基質(zhì)對整個進樣過程的影響；如果樣品中被分析物濃度已知，則可將分析物加入純?nèi)軇┲校怪_到與樣品中分析物的濃度一樣。如果樣品中分析物濃度未知，或者是純粹的無分析物的基質(zhì)無法得到，則可用分析物的同位素內(nèi)標分別加入到樣品和純?nèi)軇┲校容^二者響應差別。通常基質(zhì)效應可用抑制系數(shù)衡量，絕大部分情況下降低信號響應，抑制系數(shù)＜1，少數(shù)情況下，也能增強響應信號，此時抑制系數(shù)＞1；一般是①用流動相配制高中低三個濃度的待測物，并加入內(nèi)標，測得響應值；②空白血漿提取后加入與①相同濃度的待測物和內(nèi)標，測響應值；基質(zhì)效應 ME％＝響應值②/響應值①×100％。

而柱后灌注法該方法是在柱后不斷注入同位素標記物溶液，同時將空白基質(zhì)提取溶液進樣到液相色譜柱中。該方法能對整個進樣過程基質(zhì)效應進行評估，待同位素標記物溶液進入質(zhì)譜后會顯示出一段基線響應，在連續(xù)進樣的過程中評估出峰時間基質(zhì)的影響，若信號不穩(wěn)定，出現(xiàn)基線抑制或增強，都表明存在基質(zhì)效應。柱后灌注法能直觀的展現(xiàn)整個采集過程的基質(zhì)效應情況，但不能給出具體的數(shù)值；且柱后灌注法液相輸入的仍然是空白基質(zhì)。

由于存在內(nèi)源性分析物的樣品不存在空白基質(zhì)，而目前這兩種技術都只是針對目標化合物進行評價，不適用于內(nèi)源性分析物的基質(zhì)效應評價。更重要的是，這兩種方法只能對特定的樣本進行基質(zhì)效應評價，對于大量不同來源人血清樣本，操作步驟費事費力，致基質(zhì)效應評價不準確、繁瑣等問題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上技術問題，本發(fā)明的目的在于提供一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應的分析方法。

本發(fā)明目的是這樣實現(xiàn)的：

一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應的分析方法，其關鍵在于：

a、收集不同來源血清樣本；

b、標準溶液的配制：使用配制標準曲線的基質(zhì)溶解低值和高值兩個不同濃度水平的目標物溶液；

c、混合樣本的制備：分別將標準溶液和不同來源血清樣本按1：1比例進行混合；

d、將標準溶液、不同來源血清樣本和混合樣本進行前處理；

e、測定：將上述三種溶液注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進行分析，得到三種溶液的面積比，待測物峰面積比/待測物同位素內(nèi)標峰面積比；