[發(fā)明專利]一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應(yīng)的分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110489452.0
• 申請日: 2021-05-06
• 公開（公告）號: CN113189237A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董銳
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶黃嘉同怡科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 重慶上義眾和專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50225
• 代理人: 譚勇

1.一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應(yīng)的分析方法，其特征在于：

a、收集不同來源血清樣本；

b、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：使用配制標(biāo)準(zhǔn)曲線的基質(zhì)溶解低值和高值兩個不同濃度水平的目標(biāo)物溶液；

c、混合樣本的制備：分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和不同來源血清樣本按1：1比例進行混合；

d、將標(biāo)準(zhǔn)溶液、不同來源血清樣本和混合樣本進行前處理；

e、測定：將上述三種溶液注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進行分析，得到三種溶液的面積比，待測物峰面積比/待測物同位素內(nèi)標(biāo)峰面積比；

f、采用計算公式ME％＝(A-B)/B*100％進行相對誤差計算；其中ME％為血清與標(biāo)準(zhǔn)溶液相對基質(zhì)效應(yīng)，A為混合樣本檢測的面積比，B為(血清樣本面積比+標(biāo)準(zhǔn)溶液面積比)/2；

g、ME％的判定：20％≤ME％≤20％，基質(zhì)效應(yīng)可忽略；ME％＞20％，基質(zhì)效應(yīng)抑制嚴(yán)重；ME％＜-20％，基質(zhì)效應(yīng)增強嚴(yán)重。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應(yīng)的分析方法，其特征在于所述步驟b中的基質(zhì)為5％BSA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應(yīng)的分析方法，其特征在于所述步驟b中的目標(biāo)物溶液為25羥基維生素D2和/或25羥基維生素D3；其高值濃度為20ng/mL或40ng/mL；其低值濃度為5ng/mL或10ng/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應(yīng)的分析方法，其特征在于所述步驟d中前處理方法為：

a)移取血清樣本或標(biāo)準(zhǔn)品工作液0.150mL，加入0.02ml內(nèi)標(biāo)工作液(濃度為200ng/mL)，充分混勻；

b)加入硫酸鋅溶液0.150mL；

c)加入乙腈0.300mL；

d)劇烈震蕩30s，22℃～28℃靜置15min；

e)加入正已烷1.00mL；

f)劇烈震蕩3min；

g)離心5min，離心力≥14000g；

h)可見樣本分為三層，使用1.5ml離心管，取最上層有機層0.800mL于另一離心管中，注意不要觸及中間的水層；

i)室溫下氮氣吹干；

j)加入75％甲醇溶液80ul；

k)充分混勻30s，離心2min，離心力≥14000g。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評價血清內(nèi)源性化合物基質(zhì)效應(yīng)的分析方法，其特征在于所述步驟e中液相色譜的條件包括：

a)色譜柱：反向C18色譜柱；規(guī)格內(nèi)徑和理論塔板數(shù)滿足使用要求；

b)流動相：流動相A為0.1％甲酸水；流動相B為0.1％甲酸甲醇；

c)流速：0.5mL/min；

d)進樣量：0.010mL；

e)柱溫：50℃。