[發明專利]中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法

在審

• 申請號: 202110483879.X
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113203852A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 張威;王明輝;張小樂;劉東超
• 申請（專利權）人: 河南華普盾安生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/64;G01N21/78
• 代理公司: 鄭州銀河專利代理有限公司 41158
• 代理人: 陳玄

本發明涉及中藥材中黃曲霉毒素B₁的測定方法，其特征在于：包括，樣品選取：將200g中藥材用粉碎研磨機粉碎至粉末狀，使其粒徑小于2mm試驗篩，混合均勻后縮分至50g，儲存于樣品瓶中，密閉保存，供檢測使用；稱取1g中藥材試樣于50mL離心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，渦旋提取3分鐘，4000r/min離心5分鐘，上清液備用；試紙條選取：從包裝中取出黃曲霉毒素B₁免疫熒光試紙條，至于孵育器內，25℃恒溫孵育5分鐘，待用；取液：準確移取樣品選取中試樣上清液1.00mL至5mL離心管中，再準確加入溶液稀釋劑1.00mL，渦旋混勻；滴入試紙條：移取取液操作中的試樣稀釋液100μL至試紙條微孔內，繼續孵育10分鐘；本發明具有檢測準確、效率高、準確定量和精密度高的優點。

技術領域

本發明涉及黃曲霉毒素B₁測定的技術領域，具體涉及中藥材中黃曲霉毒素B₁的測定方法。

背景技術

黃曲霉毒素是一類主要由黃曲霉菌和寄生曲霉菌分泌產生的劇毒代謝產物，是迄今發現的最強致癌物質之一。黃曲霉毒素目前已發現20余種，主要包括黃曲霉毒素B₁(AFB1)、B₂(AFB2)、G₁(AFG1)、G₂(AFG2)和M₁(AFM1)等，其中AFB1的毒性最強，污染最為廣泛，它的毒性是氰化鉀的10倍，砒霜的68倍。早在1993年，黃曲霉毒素B1被世界衛生組織的癌癥研究機構劃定為已知最強致癌化學物質之一，即Ⅰ類致癌物質。產毒真菌菌株廣泛存在于自然界中，谷物、水果、中藥、茶葉、食用油和牛奶等農產品和食品均易受黃曲霉毒素B1的污染。我國屬于黃曲霉毒素污染較重的地區，特別是南方高溫高濕地區受污染的情況最為嚴重。因此加強黃曲霉毒素的檢測、特別是速測，及時了解和掌握各種食物及農產品的衛生信息，對保障我國食品消費安全具有重要意義。

現有黃曲霉毒素的檢測方法主要是精密儀器分析法和免疫學分析法。其中精密儀器分析法主要包括高效液相色譜法、色譜-質譜聯用，這些方法靈敏度高，準確性好，然而存在儀器昂貴，要求黃曲霉毒素樣品純化程度高，傳統的樣品前處理技術過程繁瑣，耗時長，對實驗環境要求高等不足，難以實現快速檢測的目的。

近年來迅速發展的免疫層析分析方法克服了上述方法的不足，作為一類新型的快速檢測分析技術，具有簡便快速的操作過程、即刻呈現測試結果、價格低廉等優點，已經被廣泛應用于醫學診斷、食品檢測等各個領域。

經過檢索可知，專利號為CN201710753370.6，專利名稱為一種檢測黃曲霉毒素B₁的時間分辨熒光試紙條及其應用的公開材料，在該公開材料中，公開了一種黃曲霉毒素B1時間分辨熒光試紙條，該試紙條包括樣品吸收墊、反應膜以及吸水墊三部分。反應膜位于中間，樣品吸收墊與吸水墊分別搭接于反應膜左右兩端。其中，樣品吸收墊上設有加樣區和微球區，微球區上載有時間分辨熒光微球；反應膜上設有檢測線(T線)和質控線(C線)，T線接上包被黃曲霉毒素B1抗原，C線包被抗兔抗體，并公開了試紙條的制備和使用方法，通過分析可知，檢測方法的操作過于復雜，精密度差，，不能準確定量，且準確性較差。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的不足，而提供一種檢測準確、效率高、準確定量和精密度高的藥材中黃曲霉毒素B₁的測定方法。

本發明的目的是這樣實現的：中藥材中黃曲霉毒素B₁的測定方法，其特征在于：包括，

樣品選取：將200g中藥材用粉碎研磨機粉碎至粉末狀，使其粒徑小于2mm試驗篩，混合均勻后縮分至50g，儲存于樣品瓶中，密閉保存，供檢測使用；稱取1g中藥材試樣于50mL離心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，渦旋提取3分鐘，4000r/min離心5分鐘，上清液備用；

試紙條選取：從包裝中取出黃曲霉毒素B₁免疫熒光試紙條，至于孵育器內，25℃恒溫孵育5分鐘，待用；