[發(fā)明專利]中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法

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• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113203852A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張威;王明輝;張小樂;劉東超
• 申請（專利權(quán)）人: 河南華普盾安生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/64;G01N21/78
• 代理公司: 鄭州銀河專利代理有限公司 41158
• 代理人: 陳玄

1.中藥材中黃曲霉毒素B₁的測定方法，其特征在于：包括，

樣品選取：將200g中藥材用粉碎研磨機(jī)粉碎至粉末狀，使其粒徑小于2mm試驗(yàn)篩，混合均勻后縮分至50g，儲存于樣品瓶中，密閉保存，供檢測使用；稱取1g中藥材試樣于50mL離心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，渦旋提取3分鐘，4000r/min離心5分鐘，上清液備用；

試紙條選取：從包裝中取出黃曲霉毒素B₁免疫熒光試紙條，置于孵育器內(nèi)，25℃恒溫孵育5分鐘，待用；

取液：準(zhǔn)確移取樣品選取中試樣上清液1.00mL至5mL離心管中，再準(zhǔn)確加入溶液稀釋劑1.00mL，渦旋混勻；

滴入試紙條：移取取液操作中的試樣稀釋液100μL至試紙條微孔內(nèi)，繼續(xù)孵育10分鐘；

獲取數(shù)據(jù)：取出試紙條插入熒光讀卡儀卡槽內(nèi)，讀取T/C比值，根據(jù)已輸入的黃曲霉毒素B₁多段線性標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取樣品中含有黃曲霉毒素的含量X(μg/kg)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法，其特征在于：所述黃曲霉毒素B₁免疫熒光試紙條的制備是利用生物信息技術(shù)制備黃曲霉毒素B₁的抗原抗體，再將黃曲霉毒素B₁抗體與熒光微球偶聯(lián)，采用干式間接競爭法制備試紙條。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法，其特征在于：將熒光微球偶聯(lián)抗體噴灑固定在纖維墊上，用適當(dāng)濃度的抗原和二抗在NC膜上劃線，將抗原和二抗包埋固定在NC膜上，37°恒溫老化24h，形成質(zhì)控線C線和檢測線T線，以樣品中黃曲霉毒素B1濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)濃度T/C熒光強(qiáng)度比值為縱坐標(biāo)，繪制多段線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知濃度樣品可通過熒光檢測儀讀取T/C值，利用多段線性標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品中黃曲霉毒素B₁的含量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法，其特征在于：所述多段線性標(biāo)準(zhǔn)曲線的設(shè)置稱取6份質(zhì)量為1.00g的樣品至于6個(gè)50mL離心管中，分別從100ng/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液中準(zhǔn)確移取0μL，10μL，25μL，50μL，100μL，150μL至上述6個(gè)離心管中；按照樣品選取、試紙條選取、取液和獲取數(shù)據(jù)的方法讀出上述6份加標(biāo)樣品的T/C比值，以加標(biāo)濃度為橫坐標(biāo)，以T/C比值為縱坐標(biāo)，建立多段線性標(biāo)準(zhǔn)曲線并輸入熒光讀卡儀。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法，其特征在于：所述黃曲霉毒素B₁標(biāo)準(zhǔn)溶液的含量為100ng/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法，其特征在于：所述溶液稀釋劑：取0.5g吐溫-20，加入100mL水中，混勻。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥材中黃曲霉毒素B1的測定方法，其特征在于：所述50％甲醇水溶液的制備為取50mL水與50mL甲醇混勻。