[發明專利]一種抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202110479816.7
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113061587B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 李平花;劉在新;盧曾軍;黃書倫;查晶晶;李冬;白興文;孫普;馬雪青;曹軼梅;付元芳;李坤;袁紅;張婧
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/42;C12N15/85;A61K39/135;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株及其構建方法和應用，屬于獸藥生物制品技術領域。rHN/NXVP1/G?H是以重組病毒rHN/NXVP1為骨架，嵌合了O/HB/HK/99的G?H環抗原表位基因；所述重組病毒在O/HN/CHA/93基礎上嵌合了O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因所得。O/HN/CHA/93和rHN/NXVP1與Cathay譜系病毒抗原不匹配，而rHN/NXVP1/G?H能與PanAsia、Mya98和Ind?2001譜系病毒抗原高度匹配，也能與Cathay譜系病毒抗原匹配，G?H環的替換拓展了口蹄疫病毒的抗原譜，制備滅活疫苗可用于防控O型多譜系FMDV的流行。

技術領域

本發明屬于獸藥生物制品技術領域，具體涉及一種抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株及其構建方法和應用。

背景技術

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDisease Virus，FMDV)引起豬、牛、羊等主要家畜和野生偶蹄動物感染的一種烈性傳染病。該病傳播迅速、發病率高，危害巨大，因此國際獸疫局(OIE)將其列為必報疫病之首，我國規定為一類動物傳染病。FMDV存在A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT37個血清型，型間無交叉保護，型內交叉保護有差異。近年來，O型FMD依然嚴重危害我國畜牧養殖業的發展。目前引發我國O型FMD的病毒主要為三個拓撲型(ME-SA、SEA和Cathay拓撲型)中的四個譜系(Mya-98譜系(SEA)、Cathay譜系、PanAsia譜系(ME-SA)和Ind-2001譜系(ME-SA))病毒株。當前FMD多毒株的混合流行加劇了病毒的變異，導致新變異毒株不斷出現，使現用疫苗與流行毒株的抗原匹配性下降或抗原不匹配，而導致疫苗的免疫失敗，迫切需要篩選與當前所有O型流行毒株抗原匹配的疫苗候選株，用于我國當前FMD的防控。

FMDV粒子結構蛋白VP1、VP2和VP3上含5個由線性或構象性的抗原表位組成的抗原位點，它們是誘導機體產生保護性抗體的主要免疫原。其中抗原位點1的G-H環是誘導機體產生中和抗體最重要的抗原表位，在疫苗免疫保護方面發揮著非常重要的作用。因此，結構蛋白VP1上的G-H環一直是FMD表位疫苗、合成肽疫苗等研究的熱門靶點。另外，FMDV在免疫壓力下基因高度易變，尤其是結構蛋白VP1上的G-H環，經常表現遺傳多樣性，其上一個或幾個氨基酸的突變常引起病毒抗原的變異，從而直接影響型內不同譜系病毒株之間交叉免疫保護。

大量的研究表明，不同血清型、亞型的RNA病毒之間無交叉反應性，但通過反向遺傳技術，替換它們免疫優勢的表位，可以提高病毒間的交叉反應性和疫苗的交叉保護能力，能夠拓展疫苗的抗原譜。如Rieder E等在A12FMDV感染性克隆的骨架上，構架了嵌合了O型或C型G-H環的重組FMDV，該病毒疫苗的豚鼠抗血清，能同時中和A型和O型或A型和C型FMDV，而嵌合C型G-H環A12 FMDV疫苗免疫豬也能產生抗C型FMDV的交叉中和抗體，能完全保護豬免遭A型FMDV的攻擊，部分保護豬免遭C型FMDV的攻擊。Jitendra KB等研究也發現，嵌合Asia1型FMDV G-H環保守表位¹⁴³GDLAVLAQR¹⁵¹的重組病毒也能夠被O型和Asia1型FMDV的多克隆抗體識別。這2個研究表明，不同血清型FMDV間嵌合高度易變的G-H環抗原表位，提高了病毒的交叉反應性和疫苗的交叉保護能力，拓展了FMD疫苗的抗原譜。盡管已有不同血清型間G-H環替換提高FMDV交叉反應性的報道，但到目前為止，O型血清型內G-H環替換對FMDV交叉反應性的影響尚不清楚。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株及其構建方法和應用，所述口蹄疫病毒株能夠同時對近些年流行的O型PanAsia譜系、Mya98譜系、Ind-2001譜系和Cathay譜系口蹄疫病毒株具有較好的交叉反應性，大大拓展了病毒疫苗的抗原譜，有利于提高我國當前O型口蹄疫的有效防控。