[發明專利]一種抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202110479816.7
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113061587B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 李平花;劉在新;盧曾軍;黃書倫;查晶晶;李冬;白興文;孫普;馬雪青;曹軼梅;付元芳;李坤;袁紅;張婧
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/42;C12N15/85;A61K39/135;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H，其特征在于，以重組口蹄疫病毒rHN/NXVP1為骨架，嵌合了口蹄疫疫苗株O/HB/HK/99的G-H環抗原表位基因；所述rHN/NXVP1重組病毒是在O/HN/CHA/93毒株的基礎上，嵌合了O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因所得；

嵌合有疫苗毒株O/HB/HK/99 G-H環基因的O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因編碼的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根據權利要求1所述抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H，其特征在于，所述嵌合有疫苗毒株O/HB/HK/99 G-H環基因的O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.權利要求1或2所述抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）以半長質粒pSK-Z123為骨架，人工合成含O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因并嵌合疫苗毒株O/HB/HK/99 G-H環基因的重組質粒，記為重組質粒pSK-Z123NXVP1G-H；

2）將步驟1）中所述重組質粒pSK-Z123NXVP1G-H用Spe I/Bgl II雙酶切，將得到的5400bp的目標條帶插入質粒pOFS中，得到重組質粒pOFS-NXVP1/G-H；

3）將步驟2）中所述重組質粒pOFS-NXVP1/G-H轉染細胞，拯救病毒，得到rHN/NXVP1/G-H。

4.根據權利要求3所述構建方法，其特征在于，步驟2）中嵌合有疫苗毒株O/HB/HK/99G-H環基因的O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.根據權利要求3所述構建方法，其特征在于，步驟2）中Spe I/Bgl II雙酶切的體系如下：

10× Buffer H 10 μL、BglⅡ4 μL、Spe Ⅰ4 μL、質粒 4 μg、ddH₂O補充至100 μL；酶切體系為在37 ℃條件下孵育1h~2 h。

6.根據權利要求3所述構建方法，其特征在于，步驟3）中在所述轉染細胞前，對所述重組質粒pOFS-NXVP1/G-H進行鑒定；

所述鑒定的方法采用Pst I酶對所述重組質粒pOFS-NXVP1/G-H進行酶切，酶切出7200bp、3282 bp、591 bp三個條帶，說明重組質粒pOFS-NXVP1/G-H包含了嵌合有疫苗毒株O/HB/HK/99 G-H環基因的O/NXYCh/CHA/2018 VP1基因。

7.權利要求1或2所述抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H或權利要求3~6中任意一項所述構建方法構建得到的O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H在制備抗原廣譜O型口蹄疫疫苗中的應用。

8.根據權利要求7所述應用，其特征在于，所述抗原廣譜O型口蹄疫疫苗的防控對象為PanAsia譜系、Mya98譜系、Ind-2001譜系和/或Cathay譜系病毒株。

9.一種抗原廣譜O型口蹄疫疫苗，其特征在于，包括權利要求1或2所述抗原譜拓展O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H或權利要求3~6中任意一項所述構建方法構建得到的O型口蹄疫病毒株rHN/NXVP1/G-H。