[發明專利]一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202110476983.6
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113186248B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 吳曈勃;涂博成;肖先金;馮子珊
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/44;C12Q1/6818
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 藍曉玉

1.一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法，所述測定方法為非診斷目的的測定方法，其特征在于，包括：

將λ exo 緩沖液、含有熒光基團及猝滅基團的報告探針序列、含有8-氧代鳥嘌呤的背景信號抑制探針序列混合；背景信號抑制探針在8-氧代鳥嘌呤位點處被切割后，與報告探針在5’-熒光基團末端形成2-nt突出結構；

將混合液加熱后逐漸冷卻，之后，加入待測樣品孵育；

孵育結束后加入λ exo，進行酶切反應，之后進行熒光檢測。

2.根據權利要求1所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法，其特征在于，所述含有熒光基團及猝滅基團的報告探針序列為：熒光基團-CCTCCACAGACACATAC-猝滅基團。

3.根據權利要求1所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法，其特征在于：所述熒光基團為FAM 熒光基團、HEX 熒光基團或 VIC 熒光基團中的任一種。

4.根據權利要求1所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法，其特征在于：所述猝滅基團為 BHQ-1 猝滅基團、BHQ-2 猝滅基團和 BHQ-3 猝滅基團中的任一種。

5.根據權利要求1所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法，其特征在于：所述含有8-氧代鳥嘌呤的背景信號抑制探針序列為TTATGGAGTATGTGTCTGTGGAoxoGGGTCGAGGTTTTTTTTTTCCTCGACCCTCCACAGACA，oxoG為8-氧代鳥嘌呤。

6.根據權利要求1所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法，其特征在于：將混合液加熱至85°C，然后逐漸冷卻至37°C，加入待測樣品；在37℃下孵育；孵育時間為30min。

7.如權利要求1所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定方法在8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定中的應用；所述應用為非診斷目的的應用。

8.一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定試劑盒，包括：λ exo緩沖液，含有熒光基團及猝滅基團的報告探針序列、含有8-氧代鳥嘌呤的背景信號抑制探針序列，λ exo酶；背景信號抑制探針在8-氧代鳥嘌呤位點處被切割后，與報告探針在5’-熒光基團末端形成2-nt突出結構。

9.如權利要求8所述的一種基于背景信號抑制探針的8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定試劑盒在8-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶測定中的應用；所述應用為非診斷目的的應用。