[發明專利]一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗及其制備方法在審
| 申請號： | 202110476341.6 | 申請日： | 2021-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN113069537A | 公開（公告）日： | 2021-07-06 |
| 發明（設計）人： | 王建新;顧云;張聿恒 | 申請（專利權）人： | 江蘇欣生元生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61K39/00 | 分類號： | A61K39/00;A61K39/39;A61K9/51;A61K47/36;C07K19/00;C12N15/70;A61P35/00 |
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| 地址： | 226000 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 ras 變異 新生 抗原 融合 蛋白 納米 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗，其特征在于，包括不少于4種17個氨基酸的多肽片段，多肽片段見序列表，多肽之間用蛋白接頭(GGGGS)n進行無順序差別的隨機連接形成融合蛋白的形式，并與免疫佐劑及納米顆粒組成一種混合微粒。
2.根據權利要求1所述的一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗，其特征在于，免疫佐劑為Poly-ICLC。
3.根據權利要求1或2所述的一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗，其特征在于，納米顆粒是可降解的。
4.根據權利要求1或2所述的一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗，其特征在于，納米顆粒是殼聚糖。
5.制備權利要求1至4所述的一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗方法，其特征在于：
(1)表達載體的構建：選取7種上述可能的變異多肽氨基酸序列用(GGGGS)3序列作為融合蛋白接頭進行適當排序設計成融合蛋白基因，按照大腸桿菌密碼子偏好優化后進行合成，構建于質粒pET-28a(+)的NdeI和EcoRI酶切位點間形成rRAS-mEpivax融合蛋白載體，經測序鑒定后備用；
(2)轉化：將大腸桿菌感受態加入rRAS-mEpivax融合蛋白載體在培養基上培養菌落；
(3)誘導分泌表達：將活化的含載體rRAS-mEpivax的BL21重組菌株接種到卡那霉素的新鮮TB培養基中進行分泌表達；
(4)純化：對RAS重組多肽裂解液進行純化；
(5)疫苗制備：表達純化得到的融合蛋白與納米顆粒及免疫佐劑組成一種混合微粒。
6.根據權利要求5所述的制備一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗方法，其特征在于，免疫佐劑為Poly-ICLC。
7.根據權利要求5或6所述的制備一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗方法，其特征在于，納米顆粒是可降解的。
8.根據權利要求5或6所述的制備一種基于RAS變異新生抗原表位的融合蛋白納米疫苗方法，其特征在于，納米顆粒是殼聚糖。
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