[發明專利]一種檢測含巰基蛋白質三維結構狀態的方法

有效

• 申請號: 202110475786.2
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113109298B
• 公開（公告）日: 2023-02-14
• 發明（設計）人: 張磊;王露露;趙倩倩;沈晶晶;范曲立;黃維
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: G01N21/552
• 分類號: G01N21/552
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

1.一種檢測含巰基蛋白質三維結構狀態的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：稱取一定量的未知折疊狀態的含巰基蛋白質作為待測樣品靜置孵化形成待測蛋白質溶液；采用Au@Ag納米顆粒形成LSPR生物傳感器；將獲得的待測蛋白質溶液稀釋后滴加到所述LSPR生物傳感器上，孵育一段時間后沖洗、吹干形成Au@Ag納米顆粒-蛋白組裝體；暗場顯微鏡下觀察所述組裝體的等離子散射光譜的紅移量，根據所述散射光譜紅移量與特定蛋白質折疊狀態之間的對應關系模型，直接判斷待測特定蛋白質目前的折疊狀態；

所述散射光譜紅移量與特定蛋白質折疊狀態之間的對應關系模型的建立方法，包括以下步驟：選取自然狀態下高活性的蛋白質靜置孵化配置成溶液后，與Au@Ag納米顆粒進行組裝形成組裝體；建立變性劑濃度梯度，將不同濃度的變性劑分別滴加至Au@Ag納米立方顆粒-蛋白質組裝體上進行反應，形成不同折疊程度的蛋白質，反應時間至少半個小時；暗場顯微鏡下觀察組裝體等離子散射光譜的紅移量，將變性劑濃度對散射光譜紅移量作相關分析，得到特定的變性劑濃度與散射光譜紅移量的對應關系模型，而不同濃度的變性劑對應蛋白質的不同折疊狀態，從而形成散射光譜紅移量與特定蛋白質折疊程度之間對應關系模型。

2.根據權利要求1所述的一種檢測含巰基蛋白質三維結構狀態的方法，其特征在于，所述建立變性劑濃度梯度具體為：設置變性劑濃度梯度值n，不同梯度值n之間的差值相同，所述蛋白質的不同折疊狀態可以采用折疊程度P表示，折疊程度P分為自然折疊狀態、中間狀態以及完全變形態。

3.根據權利要求1所述的一種檢測含巰基蛋白質三維結構狀態的方法，其特征在于，所述變性劑為鹽酸胍。

4.一種用于研究環境條件對含巰基蛋白質三維結構狀態影響的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：選取自然狀態下高活性的蛋白質靜置孵化配置成溶液后，與Au@Ag納米顆粒進行組裝形成組裝體；將組裝體置于不同的環境條件下，包括溫度、化學溶液、濕度、輻射條件；暗場顯微鏡下觀察組裝體等離子散射光譜的紅移量，根據權利要求1中所述對應關系模型，可以直接判斷此蛋白質目前的折疊狀態，即可獲得相應的環境條件與此蛋白質折疊狀態直接的對應關系。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于，所述Au@Ag納米顆粒為Au@Ag納米立方顆粒。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述Au@Ag納米立方顆粒粒徑大小為55nm左右。

7.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于，所述含巰基蛋白質為牛血清蛋白，濃度為0.125mg/mL~1mg/mL。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述牛血清蛋白濃度為0.5mg/mL。

9.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于，所述蛋白質靜置孵化配置成溶液具體為采用pH為7.0～7.4的磷酸緩沖溶液在暗室下常溫靜置孵化4-6h。