[發明專利]基于LAMP技術的河鲀及其制品快速鑒定方法在審
| 申請號： | 202110475190.2 | 申請日： | 2021-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN113801942A | 公開（公告）日： | 2021-12-17 |
| 發明（設計）人： | 丁艷菲;朱誠;陳成統;呂晨澤;張雷蕾;黃麗紅 | 申請（專利權）人： | 中國計量大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州恒翌專利代理事務所(特殊普通合伙) 33298 | 代理人： | 王從友 |
| 地址： | 310018 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 lamp 技術 及其 制品 快速 鑒定 方法 | ||
1.基于LAMP技術的河鲀及其制品快速鑒定方法，其特征在于該方法包括以下的步驟：
1)河鲀魚樣品的DNA提取使用海洋動物組織基因組DNA提取試劑盒進行，制備好的基因組溶液置于-20℃保存；
2)基于COI序列設計1組針對東方鲀屬物種的引物；或者，基于D-loop序列設計了1組針對暗紋東方鲀的引物；
基于COI序列的引物序列如下：
基于D-loop序列的引物序列如下：
3)LAMP反應采用20μL的反應體系，具體成分如下：
4)開始反應前，在反應液面上加入20μL石蠟油；反應條件為：65℃反應60min，80℃滅活10min；
5)LAMP反應產物的檢測采用兩種方式之一：
①電泳檢測；用1×TAE緩沖液配置濃度為2％的瓊脂糖凝膠，取10μL反應產物與2μL 6×Lodding buffer混合后加入上樣孔，120V電泳30min；電泳結束后，通過凝膠成像系統觀察，若存在梯度條帶則反應為陽性；
②染料法檢測：LAMP反應前在PCR管管蓋或管壁上滴加5μL 100×SYBR Green I染料，待反應結束后混勻，若顏色由橙色變為綠色則反應為陽性。
2.一種LAMP技術的河鲀及其制品快速鑒定用引物對，其特征在于，該引物對的引物序列如下：
該引物對基于COI序列設計，針對東方鲀屬物種。
3.一種LAMP技術的河鲀及其制品快速鑒定用引物對，其特征在于，該引物對的引物序列如下：
該引物對D-loop序列設計，針對暗紋東方鲀。
4.一種LAMP技術的河鲀及其制品快速鑒定用試劑盒，該試劑盒包括權利要求權利要求2和/或3所述的引物對。
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